.

Фармакогенетика цитохром
Р450-зависимой системы
микросомального окисления

Лекция 4
Митохондриальные цитохромы

 включают 4 семейства
 реакции биосинтеза стероидов
 синтезируются несвязанными с мембранами
полирибосомами в виде больших
предшественников и транспортируются в
органеллы с одновременным разделением и
выделением NH2 концевых экстрапептидов
 получают электроны из железосодержащего
белка адренодоксина через NADPH-
адренодоксин оксиредуктазу.
Микросомальные цитохромы

 состоит из 4 семейств
 окисляют стероиды и жирные кислоты,
лекарства, ксенобиотики, включая
канцерогены
 локализуются в мембранах
эндоплазматического ретикулума
 синтезируются на мембраносвязанных
полирибосомах и включаются в липидный
биослой через узнающие системы
 электроны к ним поступают через
флавопротеин NADPH-P450 оксиредуктазу или
через цитохром b5
Номенклатура цитохромов
 > 40% сходство аминокислотного
состава – семейства
 > 59% сходства - подсемейства
 Р450 II А 1 = CYP 2 A 1
Семейство Р 450 I = СYP 1
 CYP I А1 экспрессируется во многих
тканях помимо печени
 Определяется только при введении
индукторов - 3-метилхолантрен (MD),
2,3,7,8-тетрахлориддибензо-р-диоксин
(ТСDD)
 Cубстраты - полициклический
ароматический углевод бензо[α]пирен,
многие полициклические ароматические
углеводороды
 Семейство Р 450 I = СYP 1
 CYPI А2 постоянно экспрессируется в печени
 также может быть индуцирован MD и TCDD
 Обладает высокой каталитической активностью по
отношению к ариламинам.
 Активирует некоторые гетероциклические амины,
являющиеся промутагенами, которые могут
образовываться в результате пиролиза белков.
Активность CYP1A1 И А2 по отношению к субстратам
перекрывается. Таким образом, оба фермента могут
играть важную роль в активации канцерогенов.
 Участвует в метаболизме препаратов: кофеина,
теофиллина, фенацетина, клозапина, имипрамина,
такрина.
 Кофеиновый тест используется для фенотипирования
активности CYP1А2.
Семейство Р 450 I = СYP 1

 CYP1B1 – окисляет –
 полициклические
ароматические углеводороды
 препараты - кофеин и
теофиллин
 эндогенные субстраты –

17бета-эстрадиол, эстрон,
тестостерон, прогестерон
 Семейство Р 450 II= CYP 2
Подсемейство 2А
 A1 и А2 специфически гидроксилируют
тестостерон
 Полиморфизм выявлен у фермента А6
 CYP2A6 имеет широкую субстратную
специфичность
 участвует в метаболизме препаратов –
кумарин, метоксифлуран, галотан,
вальпроевая кислота и дисульфирам
 Субстратами являются также токсины –
никотин, котинин, N-нитрозоноркотинин,
N-нитрозодиэтиламин, 1,3-бутадиен, 2,6-
дихлорбензонитрил
Семейство Р 450 II= CYP 2
Подсемейство 2В

 Ферменты индуцируются
фенобарбиталом
 Полиморфизм установлен для
CYP2В6
 Фермент метаболизирует
препараты бупропион,
циклофосфамид,
изофосфамид.
 Семейство Р 450 II= CYP 2
Подсемейство 2С
 Полиморфизм установлен для CYP2С8, С9 и
С19.
 CYP2С8. Субстраты – паклитаксел,
зопиклон. Эндогенные субстраты –
ретиноевая кислота.
 CYP2С9 Субстраты – лозартран, толбутамид,
фенитоин, диклофенак, ибупрофен,
напроксен, пироксикам
 CYP2С19 – субстраты – омепразол,
диазепам, флунитразепам, прогуанил,
пропранолол, сертралин, моклобемид,
толбутамид
Семейство Р 450 II= CYP 2
Подсемейство 2Е
 Фермент индуцируется этанолом
 Метаболизирует этанол, ацетон,
ацетоацетат
 катализирует деметилирование N-
нитрозодиметиламина
 механизм индукции цитохрома
независит от процессов транскрипции
 Индукция происходит за счет снижения
оборота фермента, в результате чего
увеличивается его количество
 Семейство Р 450 II= CYP 2
Подсемейство 2D
 Полиморфизм установлен для CYP2D6
 Субстраты – аймалин, энкаинид,
флекаинид, пергекселин, метопролол,
пропранолол, тимолол, амитриптилин,
дезипрамин, нортриптилин, пароксетин,
галоперидол, трописетрон, кодеин,
трамадол, декстрометорфан, галантамин
 Дебризохин и спартеин – первые
препараты, по которым был установлен
выраженный полиморфизм в человеческой
популяции, использовались для
фенотипирования. Сейчас изъяты из
практики
 эндогенные субстраты – триптамин и
тирамин
Семейство Р 450 III= CYP 3
 У человека ферменты семейства
вовлечены в 6-β-гидроксилирование
тестостерона, в 2- и 4-
гидроксилирование 17альфа-
эстрадиола.
 СYP3A4, A5 и A7
 CYP3А4 – фермент, метаболизирующий
около 50% всех фармакологических
препаратов, метаболизирующихся с
участием Р450
 Полиморфизм фермента не установлен
 Семейство Р 450 IV= CYP 4
 Цитохромы семейства участвуют в биосинтезе и
деградации гормонов и других сигнальных молекул,
включая тромбоксан, стероидные гормоны и
дериваты ретиноевой кислоты
 Метаболизируют лауреновую (lauric) кислоту в ω-
позиции, арахидоновую кислоту.
 индуцируются гиполипидемическим препаратом
клофибратом
 Из мутагенов ферменты семейства способны
активировать 2-аминофлюорен
 Есть данные о специфической экспрессии
цитохромов при беременности.
Полиморфизм окисления
дебризохина /спартеина (СYP2D6)

 дебризохин – симпатолитическое
антигипертензивное средство
 Smith et. al
 спартеин, родостимулирующее и
антиаритмическое средство
 Eichelbaum et al.
 Полиморфизм окисления
дебризохина /спартеина

 метаболическое отношение (МО)

дебризохин к 4ОН дебризохину
 МО > 12,6 (РМ)
 спартеин к 2- и 5-дигидроспартеину
 MO > 20 (РМ)
 РМ – poor metabolizers (медленные)
 EM – extensive metabolizers (быстрые = норма)
 UEМ- ultraextensive metabolizers (ультра быстрые)
 РМ - гомозиготы по рецессивному гену, ЕМ — либо
гомозиготы по доминантному гену, либо гетерозиготы
Interethnic comparison of frequencies of some CYP2D6 alleles
*1 *2 *1XN, *4 *5 *10 *17
Wild Functional *2XN Splicingd Deletion P34S, T107I,
Ethnic group type Duplication efect S486T R296C,S4
86T
Enzyme normal normal increased deficient deficient decreased decreased
activity
Caucasians 34% 33% 1.5% - 20% 5% 3% 1%
3.5%
Spaniards* 3.5% 11.6% 4% - -

Chinese 23% 20% 1% <1% 5% 50% -

Japanese 42% 12% 0 0 13% 33% -

Korean 33% 24% 2% 0 5% 36% -

Ngawbe - - - 17% - - -

Ethiopians - - 29% 1% 3% 16% 18%

Zimbabwean 2% 2% 4% 1.6% 34%

s
Saudi - - 10.4% 3.5% 1% 3% 3%
Arabians

* not included in Caucasian studies

Based on Meyer and Zanger, 1997; Van der Weide and Steijns, 1999.
 Сердечно-сосудистые
средства
Дебризохи Алифатическое
н гидроксилирование
NH
N C NH2

N
Спартеин N-гидроксилирование
N

Пропафен Ароматическое O

он гидроксилирование C CH2 CH2

O CH2 CH CH2 NH CH2 CH2 CH3

OH

NH

Гуаноксан Ароматическое O CH2NHC

гидроксилирование NH2
 Сердечно-сосудистые
Энкаинид средства
О-деметилирование H 3C
N
CH2CH2

N C
O
OCH3

Пергексе- Алифатическое
CH2CH
лин гидроксилирование
N
H

N-пропил- Ароматическое
аймалин гидроксилирование
OH CH2CH2CH3
N OH
N
CH3
CH2CH3
  - адреноблокаторы
Буфуралол Алифатическое и OH CH3

ароматическое CH CH2 NH C CH3

O
гидроксилирование CH2CH3
CH3

Мето- Алифатическое
OH CH3
OCH2 CH CH2 NH CH
пролол гидроксилирование и CH3

О - деалкилирование
CH2CH2OCH3

Пропра- Ароматическое OH CH3

нолол гидроксилирование OCH2 CH CH2 NH CH

CH3

S
Тимолол Алифатическое N N
OH CH3
гидроксилирование O N OCH2 CH CH2 NH CH

CH3
 Трициклические
антидепрессанты
Амитриптил Бензильное
ин гидроксилирован
ие C
CH3
CH CH2 CH2 N
CH3

Нортриптил Бензильное
ин гидроксилирован
ие
C
CH3
CH CH2 CH2 N
H

Дезметил- Ароматическое
имипрамин гидроксилирован
ие N
CH3
CH2 CH2 CH2 N
H
 Разные
Декстро- О- H3C N
меторфан деметилирование

OCH3

Метокси- О-
амфетамин деалкилирование CH3
O

NH2
CH2C
CH3

Фенформи Ароматическое
н гидроксилировани
е CH2 CH2 NH C NH C NH2
NH NH
Р450 II D6
 в отличие от других цитохромов
не индуцируется классическими
индукторами –
антипирином, фенобарбиталом,
рифампицином.
 Декстрометорфан
 противокашлевое средство
 метаболизируется через окислительное
деметилирование
 используется в качестве тестового средства
 в сочетании в методами молекулярной
генетики появилась возможность
определения гетерозигот
 гетерозиготы МО от 1 до 10
 РМ – 10-20
 UEM – 0,6.
 Антиаритмики
 Флекаинид — антиаритмик 1-го класса по Вильямсу.
Широко используется при лечении желудочковых
аритмий. У 20 % больных при его применении
возникает проаритмогенное действие.
 установлена зависимость метаболизма флекаинида от
дебризохин-спартеинового типа окисления
 Энкаинид (Encainide) высокая концентрация
энкаинида у РМ не сопровождается увеличением или
расширением спектра побочных эффектов, т.к.
активен метаболит
 у больных с фенотипом РМ препарат употребляется в
стандартных дозах.
 У больных с фенотипом ЕМ концентрация исходного
соединения должна быть меньшей.
 Антиаритмики
 Пропафенон — антиаритмик 1-го класса,
имеет свойства бета-блокатора
 У РМ образование 5-гидроксипропафенона
– активного метаболита - снижено
 При одинаковом дозировании равновесная
концентрация быстрее достигается у РМ,
т.к. менее выражен эффект первого
прохождения через печень
 Высокие концентрации пропафенона
оказывают побочное действие на ЦНС
 У РМ эти эффекты наблюдаются в 67 %
случаев, у ЕМ — в 14 %
 Пропафенон вводится в виде рацемата
 Активность S- и R-энантиомеров в
отношении натриевых каналов одинакова
 свойствами антагониста β-адренорецепторов
обладает S-энантиомер
 сродство к Р450 II D6 имеет R-энантиомер
 Поэтому эффект первого прохождения,
существенный для судьбы препарата у ЕМ,
сказывается в основном на содержании R-
энантиомера.
 фенотипические различия в эффекте
пропафенона, зависимые от влияния на
натриевые каналы, более вероятны, чем
связанные с антагонизмом β-
адренорецептора и обусловленные S-
энантиомером пропафенона.
 N-пропилаймалин
 В клиренсе его основных метаболитов между
РМ и ЕМ наблюдаются десятикратные
различия
 Рекомендованные дозы препарата — от 40
до 80 мг в день
 для ЕМ требовалась доза, значительно
превосходящая рекомендованную, в то
время как для РМ — только 10–20 мг в сутки
 Установлена высокая корреляция между МО
спартеина и отношением Css к дозе
препарата
 для достижения желаемого уровня Css доза
должна варьировать от 7 мг в сутки у РМ до
110 мг у ЕМ
 Необходимость типирования очевидна
 Пергексилин — антагонист кальция
 Препарат высоко липофилен
 По метаболизму сходен с дебризохином
 В клинической практике доза пергексилина титруется
по нарастающей до снятия ангинальной боли
 У ЕМ с коротким периодом полужизни препарата его
дополнительной кумуляции нет
 при долговременном приеме у РМ концентрация в
плазме нарастает, в то время как больные уже не
находятся под жестким врачебным контролем
 побочные эффекты в виде периферических
нейропатий и повреждений печени
 Ретроспективный анализ показал, что более 50 %
больных с побочными реакциями оказались РМ.
 Антагонисты β-адренорецепторов
 дебризохиновый фенотип окисления
является основным для метопролола,
тимолола и буфаролола
 для пропранолола образование его 4-
гидроксиметаболита, сниженное у РМ,
является лишь минорным путем
биотрансформации, различий в
фармакокинетике и действии у РМ и ЕМ
не наблюдается.
 Атенолол и соталол выводятся в
неизмененном виде
 Антагонисты β-адренорецепторов
 S-изомеры обусловливают β-
адреноблокирующее действие.
 При биотрансформации 1-го прохождения
метаболизируется
R-изомер
Метопролол. У ЕМ после 1-го прохождения
количество R-изомера снижается и отношение
S/R в плазме становится около 2
Для РМ, у которых эффект 1-го прохождения
практически отсутствует, характерно
соотношение S/R = 1.
Антагонисты
β-адренорецепторов

 Если при фармакокинетическом

исследовании регистрировать
суммарный метопролол, то кривая
концентрация-эффект у РМ будет
сдвинута вправо.
 если определять содержание S-
изомера, то кривые
концентрация-эффект будут
сходны у РМ и ЕМ.