Ферменты в

нетрадиционных
средах
1
Среда работы ферментов

Все
Новые Традиционные

Граница
Граница раздела фаз
Органические
Мицеллы Твердые фазы металл- ВОДА вода-
растворителя
раствор носитель,
вода-органика

2
Среда работы ферментов
 Ферменты традиционно работают в водных средах, но в производстве часто
требуются другие (неводные) среды.
 Очень часто необходимо осуществление реакций в органических средах. Многие
реакции идут при малой или почти нулевой концентрации воды, поскольку
многие реакции синтеза органических веществ являются обратимыми.
Обратными реакциями синтеза часто являются реакции гидролиза, которые
осуществляются теми же ферментами и резко смещаются в сторону гидролиза
даже при малом количестве воды.
 Прямой переход от воды к органическому растворителю невозможен, так как в
органических средах ферменты денатурируют или теряют свою активность,
разрушая гидрофобные участки, участвующие в поддержании третичной
структуры
 Существуют разные подходы, как проводить реакции в неводных средах
3
Подходы к осуществлению
ферментативных реакций в органических
средах
 1) Реакции в трехфазных системах

Система вода – органический растворитель – твердый

носитель (с ферментом). Иммобилизованные
ферменты находятся внутри пор носителя, внутри пор
также имеется небольшой запас воды, который
необходим для функционирования фермента, хотя в
целом все гранулы носителя погружены в органическую
жидкость. Прямой контакт органического носителя с
ферментом отсутствует.
Недостаток метода: не все реакции возможно
осуществлять таким методом.

4
Подходы к осуществлению ферментативных
реакций в органических средах

 2) Системы защиты фермента от растворителя с

использованием полимерных покрытий
Фермент иммобилизуется на
поверхность непористого
носителя, а затем закрепляется
полимером, который защищает
фермент от агрессивного
прямого воздействия
органического растворителя

5
3) Включение ферментов в мицеллы

 Многие ПАВ в органических средах образуют

обращенные мицеллы. Полярные группы
обращенных мицелл солюбилизируют и
стабилизируют микрокапли воды. Фермент при
этом оказываются включен в водную среду,
соизмеримую с молекулой белка и тем самым
оказывается защищен от органического
вещества.

6
Распространенные ПАВы для
формирования обратных мицелл
 В качестве таких ПАВ могут быть использованы
бифильные соединения, например, ди-(2-этил)-
гексиловый эфир натриевой соли сульфоянтарной
кислоты (аэрозоль АТ)
 Солюблизацию проводят добавлением водного раствора
фермента в р-р ПАВа в органическом растворителе.
Получают оптически прозрачную систему, в которой
фермент диспергирован на молекулярном уровне.
 Концентрация фермента до 1 мг/мл

7
Положительные свойства
 Фермент защищен от разрушающего действия органического
растворителя оболочкой из ПАВ
 В ряде случаев даже повышается активность фермента из-за
снижения влияния ингибирования субстратом, повышается их
термостабильность в составе мицеллы.

8
Активность ферментов в
обратных
Пример:
мицеллах
 Приведена зависимость скорости пероксидазной
реакции от концентрации субстрата для реакции в
воде и в органическом растворителе с
обращенными мицеллами. Максимальная
наблюдаемая скорость реакции в системе с
обращенными мицеллами выше в 10 раз (связано с
устранением влияния ингибирования субстратом)

 Пероксидазное окисление
 1 – водная среда
 2 - октан

9
Размер мицелл
 Каталитическую активность фермента можно
регулировать, варьируя размер обращенной
мицеллы.
 Для каждого фермента характерен свой
оптимальный размер мицеллы
 Размер мицелл зависит от содержания воды
(точнее от соотношения вода:орг.растовритель)

 На рисунке показана типовая зависитмость

каталитической константы работы фермента
химотрипсина от содержания воды в системе при
использовании обратных мицелл. Оптимум
соответствует оптимальному количеству воды,
который позволяет создать оптимальный размер
мицелл
10
Размер мицелл
 Hydration ratio – степень гидратации
 При увеличении доли воды (рост W0)
увеличивается размер мицелл

11