Ограничения, связанные с

термодинамикой реакций при

ферментативном катализе в
органических средах

1
Ферменты в органическом
синтезе
 С точки зрения термодинамики многие реакции
не возможны. Например реакции с
использованием гидролаз для синтеза
амидной, эфирной и ангидридной связи
 В этих реакциях синтеза образуется вода.
 Концентрация воды в ходит в уравнение
расчета константы равновесия в числителе. В
водных средах концентрация воды высока и
равновесие смещено в сторону образования
исходных веществ, а не нужного продукта.
 Существуют разные методы, как сместить
равновесие в подобных системах

2
 1. Изменение ионного состояния
реагентов
 Многие формы сусбтратов существуют в
молекулярной и ионизированной формах. В
разных формах они имеют разное сродства к
ферменту и разные свободные энергии. В
ряде случаев в одной из форм реакция
оказывается возможной, в то время как в
другой форме не возможна (см. таблицу).
 Например термодинамически амиды
гидролизуются только в ионизированной
форме, значит в их синтезе, наоборот,
гидролиз не будет осуществляться, если
амид находится в неионизированной форме.
 Необходимо привести вещество в нужную
форму: например изменить рН, чтобы
вещества находились в нужной форме.

3
2. Перенос продуктов в
другую фазу
 Равновесие может быть сдвинуто в нужном направлении,
если продукты реакции малорастворимы или выделяются
в виде осадка
 Примеры:
 Образование нерастворимого белка

 Реакции с образованием газов

4
3. Использование
последовательных реакций
 Сдвиг равновесия может быть
возможен за счет
использования
последовательных реакцйий,
переводящих продукты
реакции в другое соединение,
тем самым смещается
равновесие в нужную сторону
 Пример: Системы
регенерации кофакторов
НАД, НАДФ и АТФ 5
4. Проведение реакций в однофазных
водно-органических системах
Добавление в систему органического растворителя может сдвинуть
равновесие в благоприятную сторону за счет:
• Уменьшение концентрации воды, что дает сдвиг равновесия
• Смещение равновесия субстратов с ионогенными группами в сторону неполярной
формы
Пример: синтез пептидной связи при нейтральных рН, исходные компоненты
могут находиться в ионизированной и молекулярной формах. Если добавить
органический растворитель в эту систему, то равновесие сместится в сторону
незаряженных форм. Например, если проводить синтез амида в 85%-м растворе
бутандиона, выход продуктов увеличивается в 80 раз.

6
 5. Проведение реакций в двухфазных
водно-органических системах
Если использовать двухфазную систему вода и несмешивающийся с ней растворитель, то субстрат
и/или продукты реакции могут находиться в органической фазе, в то время как фермент
функционировать в воднйо среде. Основное значение здесь приобретает коэффициент
распределения реагентов между водой и органической фазой.
Например: реакция синтеза эфира аминокислот с этиловым спиртом. В водной среде реакция не
идет, так как продукт быстро гидролизуется обратно. В двухфазной системе продукт (эфир) быстро
переходит в органическую фазу и не гидролизуется