Теоретический материал по теме «Ферменты.

Строение и основные свойства»

Большинство химических реакций в живых организмах протекают с участием

ферментов. Ферменты (энзимы) – специфические белки, играющие роль биологических
катализаторов. Как и небиологические катализаторы, ферменты подчиняются общим
законам катализа:катализируют только энергетически возможные реакции, не
расходуются в ходе реакции и ускоряют реакцию за счет снижения энергетического
барьера (энергии) реакции. Однако ферменты, будучи белками, обладают рядом
характерных для этого класса соединений свойств, отличающихся от свойств
неорганических катализаторов, что формирует их отличительные свойства. Прежде всего,
ферменты действуют при физиологических значениях температуры и рН среды,
проявляют высокую эффективность и специфичность действия, активность ферментов
можно регулировать.
По структуре ферменты, как и белки, могут быть простыми и сложными. Простые
ферменты состоят только из аминокислот, например, пепсин, трипсин, уреаза, фосфатаза
и др. Большинство природных ферментов относится к классу сложных белков, их
молекулы состоят из белковой части – апофермента и небелкового компонента –
кофактора. Кофакторы различаются по прочности связи с апоферментом. Кофактор,
прочно связанный с апоферментом называется простетической группой. Кофактор
связанный относительно слабыми связями (водородными, электростатическими и др.) с
белковой частью называют коферментом. В качестве коферментов выступают вещества
органической природы – водорастворимые витамины и их производные, нуклеотиды и
др.
Функциональное строение ферментов. В процессе ферментативного катализа
принимает участие не вся белковая молекула, а лишь определенный участок – активный
центр фермента. Под активным центром подразумевают уникальное сочетание
аминокислотных остатков, обеспечивающих взаимодействие с молекулой субстрата и
принимающих непосредственное участие в проведении катализа. Активный центр
образуется в процессе формирования третичной структуры фермента. В активном центре
различают контактный участок (связывающий субстрат) и каталитический (участок,
осуществляющий непосредственно катализ).
Любая ферментативная реакция протекает по схеме:
фермент
S P
где S - субстрат, Р – продукт реакции. Субстрат – это вещество, которое
превращается под действием фермента.
К основным свойствам ферментов относят: термолабильность, зависимость
активности от рН среды, специфичность действия, влияние на активность активаторов и
ингибиторов.
Влияние температуры. При повышении температуры на 100С скорость химической
реакции повышается в 2 раза. Однако из-за белковой природы фермента повышение
температуры приведет к тепловой денатурации молекул фермента. Поэтому оптимальным
значением температуры, при котором скорость реакции максимальна, является ~ 370С.
При низких температурах ферменты хорошо сохраняются, но скорость реакции резко
снижается.
Влияние рН среды. Для действия каждого фермента существует оптимум рН.
Оптимум рН – это такое значение рН, при котором активность фермента максимальна.
Например, рН для действия пепсина 1,5-2,5, для действия амилазы слюны 6,8-7,0. Любое
отклонение рН от оптимума ведет к снижению скорости ферментативной, что связано с
изменением ионизации кислых и основных групп аминокислотных остатков активного
центра.
 Специфичность ферментов. Определенная пространственная структура активного
центра обуславливает специфичность фермента – способность катализировать только
определенные химические реакции. Специфичность действия ферментов бывает
абсолютной, относительной, стереохимической.
Абсолютная специфичность – фермент катализирует превращение только одного
какого-либо субстрата. Например, аргиназа катализирует гидролиз аргинина, уреаза –
гидролиз мочевины. Относительная специфичность – фермент воздействует на
определенную химическую связь, содержащуюся в группе веществ. Например, пепсин
гидролизует пептидные связи в молекуле белка, как животного, так и растительного
происхождения. Стереохимическая специфичность – фермент катализирует превращения
только одного из возможных стереоизомеров субстрата. Это особенно ярко проявляется в
процессе реакций, характерных для L- или D-форм субстрата. Например, фермент
лактатдегидрогеназа катализирует превращение только L-формы молочной кислоты и
полностью инертна в отношении ее D-формы.
Влияние концентраций фермента и субстрата на скорость ферментативной
реакции.
Зависимость скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата
выражается гиперболической кривой (рис.2). При низких концентрациях субстрата
скорость реакции пропорциональна концентрации субстрата. При высоких концентрациях
субстрата скорость реакции не зависит от концентрации. Величина Км обозначается как
константа Михаэлиса-Ментен. Км - это такое количество субстрата, при котором
скорость ферментативной реакции равна половине от максимальной. Скорость
ферментативной реакции прямо пропорциональна концентрации фермента (рис.3). Чем
больше концентрация фермента, тем выше скорость реакции.
V V

Vmax

½ Vmax

Кm [S] [Е]
Рис. 2. Зависимость скорости Рис. 3. Зависимость скорости
реакции от концентрации субстрата реакции от концентрации фермента

Активаторы и ингибиторы. Кроме температуры и величины рН среды, на

активность ферментов влияют различные вещества, которые могут усиливать
(активаторы), или тормозить (ингибиторы) действие ферментов.
Активаторами ферментов могут быть вещества разнообразной природы, например,
НСl активирует действие пепсина желудочного сока. Часто активаторами выступают
ионы двух валентных металлов, например, ионы Мg2+ для киназ.
Снижение активности ферментов вызывают ингибиторы. Ингибиторы по типу
ингибирования делятся на две группы: обратимого действия – ингибитор связывается с
ферментом слабыми нековалентными связями и при определенных условиях легко
отделяются от фермента; необратимого действия – этот тип ингибирования наблюдается в
случае образования ковалентных связей между молекулой ингибитора и фермента, в
данном случае чаще всего модификации подвергается активный центр фермента и в
результате фермент не может выполнять каталитическую функцию.
 Обратимые ингибиторы бывают конкурентными и неконкурентными.
Конкурентный ингибитор конкурирует с субстратом за связывание с активным центром,
т.к. ингибитор и субстрат имеют сходные структуры.
Например, малоновая кислота является конкурентным ингибитором сукцината:
О О О О
НО С СН2 СН2 С ОН НО С СН2 С ОН
сукцинат малоновая кислота

Снять торможение можно избытком субстрата, вытесняющего ингибитор из

активного центра фермента. Конкурентными ингибиторами могут быть метаболиты,
накопление которых регулирует активность ферментов, и чужеродные вещества. Явление
конкурентного ингибирования лежит в основе механизма действия ряда групп
фармакологических препаратов, например противоопухолевых средств. Неконкурентный
ингибитор взаимодействует с ферментом не в области активного центра, а на каком-то от
него удалении, причем никаким избытком субстрата из комплекса не удаляются.
Связывание изменяет конформацию фермента, что нарушает взаимодействие субстрата с
активным центром фермента, а это приводит к снижению скорости ферментативной
реакции. Снять действие неконкурентного ингибитора можно лишь веществами,
связывающими ингибитор.
Регуляция действия ферментов. В клетке скорость ферментативных реакций
находится под строгим контролем, что позволяет каждой метаболической цепочке
реакций постоянно изменяться, приспосабливаясь к меняющимся потребностям клетки в
продукте. В каждой метаболической цепи есть фермент, который задает скорость всей
цепочке реакций. Он называется регуляторным ферментом. Существует несколько
способов регуляции действия ферментов:
 аллостерическая регуляция. Кроме активного центра у ферментов имеется
аллостерический центр, расположенный вне активного центра. Молекулы,
взаимодействующие с этим центром, структурно не похожи на субстрат, но влияют на
связывание и превращение субстратов в активном центре, изменяя его конфигурацию.
Такие вещества называют аллостерическими эффекторами. Эти вещества через
аллостерический центр влияют на функцию активного центра, либо вызывают
положительный эффект (активаторы), либо отрицательный (ингибиторы). Молекула
фермента может иметь несколько аллостерических центров.
 регуляция путем ковалентной модификации. Фермент изменяет активность в
результате присоединения фосфатной группы (фосфорилирование) либо ее отщепления
(дефосфорилирование).
 активация фермента путем частичного протеолиза. Некоторые ферменты
синтезируются первоначально неактивными. Неактивный предшественник называется
проферментом. Активация профермента включает модификацию первичной структуры с
одновременным изменением конформации.
 в многоступенчатых ферментативных реакциях регуляция осуществляется за
счет ингибирования по принципу обратной связи (ретроингибирование): конечный
продукт биосинтетической цепи подавляет активность фермента, катализирующего
первую стадию синтеза, являющуюся ключевой для данной цепи реакции. Конечный
продукт связывается с аллостерическим центром молекулы фермента и ингибирует всю
цепь химической реакции.
Классификация ферментов. В настоящее время известно более тысячи ферментов.
По типам катализируемых реакций ферменты делятся на 6 классов: оксидоредуктазы,
трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы (табл.1).
Таблица 1.
Реакции, катализируемые различными классами ферментов
Класс ферментов Тип реакции
Оксидоредуктазы Окислительно-восстановительные реакции всех типов
Трансферазы Внутри– и межмолекулярный перенос различных атомов, групп
атомов и радикалов
Гидролазы Гидролитическое (с участием воды) расщепление химических связей
Лиазы Негидролитическое расщепление двойных связей или образование
этих связей
Изомеразы Взаимопревращение различных изомеров
Лигазы (синтетазы) Образование связей при взаимодействии двух или более соединений
(с помощью энергии АТФ)

Изоферменты – ферменты, катализирующие одну и ту же химическую реакцию в

разных органах, но отличающиеся по первичной структуре белка. Например,
изоферменты лактатдегидрогеназы, креатинфосфокиназы. Фермент лактатдегидрогеназа
катализирует обратимую реакцию окисления молочной кислоты до пировиноградной
кислоты. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) – имеет 5 изоформ: ЛДГ1 (или НННН) и ЛДГ2 (или
НННМ) наиболее активные в сердечной мышце, ЛДГ4 (или НМММ) и ЛДГ5 (или
ММММ) – в скелетных мышцах и печени. Креатинфосфокиназа (КФК) катализирует
реакцию образования креатинфосфата и имеет 3 изофермента – ВВ, МВ, ММ. Изофермент
ВВ находится преимущественно в головном мозге, ММ – в скелетных мышцах и МВ – в
сердечной мышце.
Изучение изоферментного спектра ферментов сыворотки крови широко
используется в клинической практике: для диагностики органических и функциональных
поражений органов и тканей, для выявления локализации патологических процессов, для
оценки степени поражения.
Ферменты в медицине.
Ферментам принадлежит большая роль в диагностике заболеваний –
энзимодиагностика. Особое значение имеет изучение ферментного состава крови и
других биологических жидкостей. Понижение или повышение активности ферментов
крови, а также появление в крови ферментов, отсутствующих в ней в норме, служат
диагностическим критерием патологических изменений. Наибольшее значение имеет
место определение изоферментов. Например, активность ЛДГ1 и ЛДГ2 увеличивается при
инфаркте миокарда, активность ЛДГ4 и ЛДГ5 – при заболеваниях печени, активность ЛДГ3
(или ННММ) – при заболеваниях почек и селезенки. Диагностическое значение имеет
определение КФК-МВ при инфаркте миокарда. Количество изоформы КФК-ММ может
повышаться при травмах и повреждениях скелетных мышцах.
Кроме этого, для клинических целей имеет большое значение определение
аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ). Эти
трансаминазы катализируют реакции переноса аминогруппы с α-аминокислоты на α-
кетокислоту. Коферментом трансаминаз служит пиридоксальфосфат (витамин В 6).
Активность АсАТ повышается при инфаркте, а АлАТ – при повреждениях печени.
Для энзимодиагностики имеют большое значение знания о субклеточной
локализации ферментов. Так, появление в плазме крови ферментов, имеющих только
цитозольную локализацию, свидетельствует о воспалительном процессе; при
обнаружении митохондриальных или ядерных ферментов можно говорить о более
глубоких повреждениях клетки, например, о некрозе.
Разработаны лекарственные формы ферментативных препаратов – энзимотерапия.
Например, широко распространена заместительная терапия заболеваний желудочно-
кишечного тракта (фестал, панкреатин, мезим-форте). Протеазы (трипсин, химотрипсин)
широко применяют в лечении раневого процесса, ожогов и др.
 В основе многих заболеваний лежат нарушения функционирования ферментов в
клетке – энзимопатии. Различают первичные (наследственные) и вторичные
(приобретенные) энзимопатии. Энзимопатии проявляются в полном или частичном
отсутствии ферментативной активности; в чрезмерном усилении ферментативной
активности; в продукции патологических ферментов, которые не встречаются у здорового
человека. Наследственные энзимопатии связаны с нарушением в генетическом аппарате
клетки, приводящим к отсутствию синтеза определенных ферментов. Например,
фенилкетонурия – наследственное нарушение синтеза ферментов превращения
фенилаланина в тирозин (при отсутствии фермента фенилаланингидроксилазы). При этой
патологии происходит увеличение концентрации в крови фенилаланина. Он начинает
трансаминироваться под действием трансаминазы и превращаться в фенилпируват.
Фенилпируват выделяется с мочой, и это явление называется фенилкетонурией.
Фенилкетонурия сопровождает наследственное заболевание, при котором развивается
слабоумие – фенилпировиноградная олигофрения. При этом заболевании у детей
необходимо исключить из рациона фенилаланин.
Альбинизм-врожденное заболевание, обусловленное отсутствием фермента
тирозиназы, катализирующего превращение тирозина в меланин. Меланин –пигмент,
определяющий окраску кожных покровов, волос и радужки глаза, он защищает от
воздействия ультрафиолета, поэтому альбиносы подвержены заболеваниям кожи и глаз.
Лечение отсутствует.
Алкаптонурия-врожденное заболевание, при котором не вырабатывается оксидаза
гомогентизиновой кислоты. Как следствие гомогентизиновая кислота, накапливаясь в
организме, ыделяется с мочой и, окисляясь кислородом воздуха,превращается в алкаптон.
Алкаптон окрашивает мочу в черный цвет (второе название заболевания «черная моча»).
Заболевание нередко осложняется охронозом-отложением алкаптона в хрящевых тканях,
поэтому у детей уши и хрящевая часть носа также окрашены в темный цвет.