ВЛИЯНИЕ АКТИВАТОРОВ UCP-1 БЕЛКА НА ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ

ПРЕАДИПОЦИТОВ БУРОЙ ЖИРОВОЙ ТКАНИ КРЫС В УСЛОВИЯХ

КУЛЬТИВИРОВАНИЯ IN VITRO

Личик Е.О., Надольник Л.И.

Институт биохимии биологически активных соединений НАН Беларуси
Гродно, БЛК, 50, 230030, ekaterina.lichick@mail.ru

С ростом заболеваемости ожирением во всем мире становится очевидным, что

необходимы новые эффективные методы борьбы с этим заболеванием. Знания о бурой
жировой ткани и полученных из нее мезенхимальных стволовых клетках в качестве
потенцирующего терапевтического средства могут обеспечить новый подход в лечении и
профилактике ожирения и связанных с ним заболеваний обмена веществ.
Цель работы: оценить влияние активаторов UCP-1 белка на дифференцировку
мезенхимальных стволовых клеток бурой жировой ткани крыс в условиях культивирования
in vitro.
Материалы и методы. В работе использовался метод получения мезенхимальных
стволовых клеток из эксплантов бурой жировой ткани новорожденных крыс. Первичная
культура эксплантов ¬ это еще один подход к выделению клеток из различных тканей.
Межлопаточную бурую жировую ткань выделяли у крыс в возрасте 1-2 дня и промывали в
70% этиловом спирте для удаления загрязнений. Затем в стерильных условиях образец ткани
измельчали до кусочков размером 1-2 мм и помещали в культуральные чашки. Экспланты
бурой жировой ткани прилипали к поверхности культуральной чашки в течении 45 минут,
после осторожно добавляли среду для культивирования клеток, содержащую DMEM, ЭТС и
гентамицин. Чашки размещали в СО2-инкубаторе с 5% содержанием СО2 при 37 °С.
Культуральную среду заменяли каждые 3 дня. Для исследования изменения морфологии
клеток проводили микроскопический анализ.
Для исследования процесса дифференцировки в культуру мезенхимальных стволовых
клеток и преадипоцитов на 7-е сутки культивирования добавлялись суспензии арахидоновой,
эйкозапентаеновой и линоленовой кислот в конечных концентрациях 150 мкмоль/л. Затем
проводили микроскопический анализ структуры клеток каждые 3 суток. Полученные
предварительные результаты представлены на рисунках ниже. В конце культивирования
клетки окрашивали Oil Red O.
Результаты и обсуждение. Экспланты жировой ткани прекрепляются к поверхности
культуральной чашки в течение 45 минут, а фибробластоподобные клетки мигрируют из
прикрепленной ткани после нескольких дней культивирования. Через два дня
веретенообразные клетки мигрируют из эксплантов и быстро делятся в течение
последующих дней, и образуют монослой после 1 недели культивирования.
Клетки, подвергнутые воздействию арахидоновой кислоты, обладали большим
адипогенным потенциалом, практически во всех клетках содержались многочисленные
мелкие липидные капли, в то время как в контрольной группе клетки с липидными каплями
встречались редко. Линолевая кислота также увеличивает процесс клеток, которые
дифференцируются в адипоциты и увеличивает количество накапливаемых липидов в
каждой жировой клетке.
Как видно из полученных результатов, ненасыщенные жирные кислоты могут влиять
на процесс дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток и преадипоцитов. Клетки
бурой жировой ткани богаты митохондриями и накапливают липиды во множественных
мелких каплях вместо одной большой капли в клетках белой жировой ткани.
 А Б

В Г

Д Е
Рисунок 1. Культура преадипоцитов новорожденных крыс. Окрашивание Oil Red O,
гематоксилин
А, Б контрольная культура клеток БЖТ; В, Г культура клеток, подвергнутая воздействию 150
мкМоль арахидоновой кислоты; Д, Е культура клеток, подвергнутая воздействию 150 мкМоль
линолевой кислоты.

Заключение. В настоящем исследовании мы получили мультипотентные

мезенхимальные стволовые клетки из бурой жировой ткани методом культивирования
эксплантов. Метод эксплантов простой, экономичный и дает высокий выход клеток.
Результаты этого исследования важны для понимания специфических механизмов
направленной дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток, а также для разработки
современных технологий регуляции энергетического метаболизма. Эти технологии могут
быть основаны на активации функции бурых и бежевых адипоцитов, а также на регуляции
дифференцировки предшественников адипоцитов.