МИРЭА – Российский технологический университет

Институт тонких химических технологий имени

М.В. Ломоносова

Введение в технологию БАВ

Старший преподаватель, ученый секретарь каф. ХТБАСМиОХ

К и р и н Никита Сергеевич
Вирусы
 Классификация и структурные особенности Ig.

Основную структурную единицу молекулы антитела образуют четыре

полипептидные цепи - две идентичные легкие (L-цепи), примерно по 220
аминокислот, и две идентичные тяжелые (Н-цепи), примерно по 440
аминокислот каждая.

Все четыре цепи связаны между собой ковалентными связями

(дисульфидными мостиками) и нековалентными взаимодействиями. Молекула
состоит из двух одинаковых половинок.

Антигенсвязывающие участки формируются за счет N-конца L- и Н-

цепей, а поскольку таких участков два, антитела называют бивалентными.
Область "хвоста" образуют только Н-цепи, которые дополнительно содержат
несколько олигосахаридных цепочек. "Ветви" молекулы антитела связаны с
"хвостом" шарнирным участком.
 Кроме того, в структуре иммуноглобулинов выделяют Fab- и Fc-
фрагменты, которые образуются при действии на Ig протеолитическими
ферментами папаином и пепсином.
Протеолитические ферменты папаин и пепсин расщепляют антитела на
различные фрагменты.
Папаин дает два идентичных Fab-фрагмента с антигенсвязывающими
участками и один Fс-фрагмент. Пепсин дает один крупный бивалентный
фрагмент F(аb’)2 - фрагмент и много мелких субфрагментов, хвостовая область
отсутствует.

Расщепление папаином Расщепление пепсином

 У высших позвоночных существует пять основных классов
антител - IgM, IgD, IgЕ, IgG, IgA, каждый со своим классом Н-цепей
-  ,  ,  , , и  -соответственно.
Т.е. молекулы IgА содержат  -цепи, молекулы IgG - - тяжелые
цепи и т,д.
Разные Н-цепи придают "хвостовым" областям антител
различную конформацию и определяют характерные свойства
каждого класса.

В дополнение к пяти классам Н-цепей у высших позвоночных

имеются два типа L-цепей -  и .
Каждая из этих цепей может быть ассоциирована с любой Н-
цепью, но всегда Н- и L -цепи в антителе попарно идентичны.
Соотношение  и  цепей у разных видов млекопитающих
варьирует.
Например, у человека оно равно 70:30, у мыши – 95:5.
Сравнение разных классов иммуноглобулинов
 IgM - основной иммуноглобулин первичного иммунного ответа.
Мол. масса 950000.
В секретируемой форме IgМ представляет собой пентамер, состоящий
из пяти четырехцепочечных единиц.
В общей сложности IgМ имеет 10 антигенсвязывающих участков.
Такие пентамеры очень эффективно активируют систему комплемента.
Субъединицы расположены радиально.
Каждый пентамер содержит связывающую полипептидную цепь,
называемую J-цепью (мол. масса 15000 - 20000).
 J-цепь не имеет гомологии с иммуноглобулинами, состоит из 129
аминокислот и содержит один сложный углевод.
J-цепь синтезируется IgМ-секретирующими клетками, ковалентно
встраивается в Fс-области и инициирует процесс олигомеризации.
 IgD второй иммуноглобулин после IgM, появляющийся на поверхности
В-клетки в ходе ее развития. При этом для IgD пока не известно никакой иной
функции, кроме роли рецептора для связывания с антигеном.
Для IgD характерен самый длинный шарнирный участок - 64
аминокислоты, а сама молекула очень богата олигосахаридными звеньями,
которые выполняют какие-то биологические функции.
 IgG составляет основной класс иммуноглобулинов, находящихся в
крови. Мол. масса 150000.
Иммуноглобулины производятся в больших количествах при
вторичном иммунном ответе.
Fс-область IgG имеет способность связывается c рецепторами
фагоцитов (макрофаги) и первого компонента системы комплемента,
активируя его, в результате комплемент разрушает микроорганизм.
IgG - единственный Ig, способный переходить от матери к плоду.
У человека и мыши имеются по четыре подкласса IgG1 - IgG4,
различающихся по аминокислотной последовательности H-цепей и,
следовательно, по антигенным свойствам.
 IgА - основной класс антител в секретах (молоке, слюне, слезах, секретах
слизистой носа и кишечного тракта).

Молекулы IgА существуют в виде мономера или димера, причем в составе

секретов в основном в виде димера.

Мономеры связываются J-цепью, а также дополнительной полипептидной цепью

- секреторным компонентом (СК), которую IgА приобретает на поверхности
эпителиальных клеток, выстилающих кишечник, бронхи, протока молочных, слюнных
и слезных желез.

СК предохраняет IgА от переваривания протеолитическими ферментами

секретов.
 IgE. Мол. масса 190000.

Fс-область IgЕ имеет способность специфически связываться с

рецепторными белками поверхности базофилов и так называемых тучных
клеток.
В свою очередь, связанные c поверхностью клетки молекулы IgE
служат рецепторами для антигена.

Присоединение антигена к связанному иммуноглобулину Е

приводит к секреции тучными клетками биологически активных аминов, в
частности гистамина и серотонина, что вызывает воспаление, расширение
кровеносных сосудов и увеличение их проницаемости.

Это облегчает дальнейшее уничтожение чужеродного антигена.

Присоединение антигена к связанному
иммуноглобулину Е
Секреторные пузырьки,
содержащие гистамин IgE-специфический
рецептор для Fc

Тучная клетка

IgE связывается Мультивалентный антигенГистамин высвобождается

С рецептором связывает соседние путём эндоцитоза
молекулы IgЕ
 В настоящее время принято следующее определение вирусов:
это автономные структуры, способные функционировать и репродуцироваться в восприимчивых к

ним клетках животных, растений, простейших, грибов, бактерий. При этом вирусы подчиняются законам

органического мира на Земле.

Существовало много гипотез о происхождении вирусов, этих "взбесившихся генов", как их раньше

называли. Сейчас принято считать, что они возникли и эволюционировали вместе с клеточной формой

жизни. Природа как бы опробовала на вирусах все возможные формы генетического материала, (разные

виды ДНК и РНК), прежде чем окончательно остановила свой выбор на двойной спирали ДНК.
 Химический состав вирусов.
Просто организованные вирусы представляют собой нуклеопротеиды или нуклеокапсиды и

состоят из нуклеиновой кислоты и нескольких кодируемых ею белков, формирующих вирусную

оболочку вокруг нуклеиновой кислоты - капсид.

Сложноорганизованные вирусы содержат дополнительные оболочки, липидные,

липопротеидные, гликопротеидные или белковые, т.е. помимо нуклеиновых кислот в состав входят

белки, липиды и углеводы.

 I. Нуклеиновые кислоты. Клетки всех живых организмов содержат два вида
нуклеиновых кислот - ДНК и РНК. Вирусы содержат только один вид НК. При этом и

та и другая НК может быть хранителем наследственной информации, выполняя таким

образом функции генома.

а). Вирусные ДНК (мол. масса 1-250106): молекула, может быть однонитчатой,

двунитчатой, линейной, кольцевой.

В геномах, представленных двунитчатыми ДНК, информация обычно

закодирована в обеих нитях ДНК. Это свидетельствует о максимальной экономии

генетического материала. При этом, в основном, наблюдается отсутствие повторов в

последовательности.
Вирусные ДНК
 б) Вирусные РНК. Примерно 80% изученных вирусов содержат РНК-геном, что
является уникальной особенностью вируса. Структура вирусных РНК чрезвычайно
разнообразна.
Вирусы, содержащие однонитчатые РНК, делятся на две группы- у первой группы
вирусов геном обладает функциями и-РНК, т.е. обладает способностью непосредственно
переносить генетическую информацию на рибосомы (условно их называют «плюс-
нитевые РНК вирусы» - РНК(+)-вирусы).
У второй группы геномная РНК не обладает свойствами и-РНК. Функцию и-РНК
может выполнять только РНК, комплементарная геномной. Процесс транскрипции
осуществляется в зараженной клетке, при этом вирус несет с собой фермент -
транскриптазу, т.к. естественного аналога такого фермента в клетках нет. Такие вирусы
называют РНК(-)-вирусы.
Двунитчатые РНК - необычный тип НК, распространен среди вирусов животных и
растений. Общей их особенностью является фрагментированное состояние генома
(обычно 8-11 фрагментов).
 2. Белки. В зараженной клетке вирусный геном кодирует синтез двух групп

белков - структурных, которые входят в состав вирусных частиц потомства, и

неструктурных, которые обслуживают процесс внутриклеточной репродукции

;

вируса.

а) Структурные белки. Различают две группы структурных белков:

- капсидные белки, образующие капсид (футляр) для НК, геномных белков и

ферментов. Эти белки иногда называют капсомеры.

- суперкапсидные белки, входящие в состав наружной вирусной оболочки.

Поскольку суперкапсид также называют ''пеплос" (мантия), то эти белки еще

называют пепломерами. Просто организованнее вирусы имеют капсид,

сложноорганизованные - капсид и пеплос.

 Основным принципом строения капсидной оболочки вирусов является

принцип субъединичности, т.е. построение капсида из идентичных повторяющихся

цепей, склонных к самосборке. Самосборка субъединиц запрограммирована в первичной

структуре белка и приводит к строго упорядоченной структуре оболочки, обладающей

наименьшей свободной энергией

Суперкапсидные белки (обычно гликопротеины) являются внутримембранными

белками сложно организованных вирусов и образуют "шипы" на поверхности капсида.

Основной их функцией является взаимодействие со специфическими рецепторами

клеточной поверхности. Причем в процессе эволюции у вирусов выработалась адресная

функция, т.е. способность связываться только с клетками, имеющими ядро, за счет

специфических рецепторов клетки-мишени - антигенов МНС.

 3. Липиды. В составе сложно организованных вирусов липиды образуют

липидный бислой, в который встроены суперкапсидные белки. Липиды составляют

15-35% сухого веса вируса и состоят на 50-60% из фосфолипидов и 20-30%

холестерина

4. Углеводы. Углеводный компонент вирусов находится в составе гликопротеинов и составляет

10-15% от массы вирусов. При этом углеводы играют значительную роль в структуре и функциях

гликопротеинов поверхности вируса, предотвращая белок от разрушения ферментами и участвуя в

реакциях узнавания и связывания с клетками-мишенями.

 Классификация и номенклатура вирусов. В основу современной классификации
вирусов положены следующие критерии:
1. Тип нуклеиновой кислоты (РНК или ДНК), ее структура (количество нитей);
2. Наличие липопротеидной оболочки;
3. Стратегия вирусного генома (способ репродукции);
4. Внешний размер, тип симметрии;
5. Круг хозяев;
6. Географическое распространение;
7. Антигенные свойства и некоторые другие.
На основании перечисленных принципов, вирусы делятся на семейства и
подсемейства (пп. 1 и 2), роды и типы - остальные пункты. Современная классификация
охватывает более 4/5 всех известных вирусов, которые распределены в 19 семейств, из них
- 7 ДНК-содержащих и 12 РНК-содержащих вирусов.

Номенклатура вирусов.

Для упорядочения наименований вирусов выработан ряд правил.

Название семейств оканчивается на «viridae», подсемейств – «virinae», рода – «virus».

Например, у вируса гриппа: семейство - orthomyxoviridae, подсемейства нет, род – influenzavirus, типы - A, B, C.
 Введение
Вирус - автономная генетическая структура, способная функционировать и
репродуцироваться в восприимчивых к нему клетках человека, животных,
растений, грибов, простейших и бактерий.

29
Контагиозность – т.е. свойство
инфекционных агентов передаваться
от больных организмов здоровым

Патогенность – т.е. способность

быть причиной патологии

Вирулентность – т.е. показатель

выраженности патогенного потенциала
у конкретного инфекционного агента

30
 Процесс репродукции вирусов может бить условно разделен на две фазы. Первая
фаза охватывает события, которые ведут к адсорбции и проникновению вируса в клетку,
освобождению его внутреннего компонента и модификацию его таким образом, что он
приобретает способность вызывать инфекцию.

Первая фаза процесса репродукции вирусов включает в себя три стадии:

1). адсорбция вируса на поверхности клетки;
2). проникновение в клетку;
3). раздевание вируса в клетке.

После того, как только эти события произошли, начинается вторая фаза

процесса, включающая экспрессию вирусного генома:

1). Транскрипция;

2). Трансляция;

3). репликация генома;

4). сборка вирусных компонентов;

5). выход вируса из клетки.

 Адсорбция вируса на поверхности клетки.

Взаимодействие вируса с клеткой начинается с процесса адсорбции, т.е.

взаимодействия антигенных детерминант, расположенных на поверхности вируса, с
рецепторами клетки-мишени.

Наличие специфических рецепторов на поверхности клетки в ряде случаев

обуславливает феномен зависимого от "хозяина" ограничения, т.е. способности
вируса заражать лишь определенные виды животных.

Антигенные детерминанты или как их еще называют, "вирусные

прикрепленные белки" хорошо различимы в электронном микроскопе и имеют
различное строение (шипы у оболочечных, корона у корона-вирусов и т.д.) и
расположение на поверхности.
 Проникновение вирусов в клетку.

Исторически сложилось представление о двух механизмах проникновения вируса в клетку: путем

эндоцитоза или слияния.

Рецепторный эндоцитоз - "виропексис" представляет собой обычный механизм поступление в

клетку питательных веществ. На плазматической мембране имеются специальные ямочки, покрытые со
стороны цитоплазмы белком клатрином. Связываясь с рецепторами, вирус попадает в ямочку, обволакивается
белком клатрином с образованием вакуоли, далее продвигается в цитоплазме и после слияния с ядерной
мембраной высвобождает свой геном.

В случае слияния вируса и клетки происходит интеграция липидных оболочек вируса и клетки. При
этом внутреннее содержимое вируса оказывается в цитоплазме.
 Раздевание вируса в клетке.

Для того, чтобы вызвать инфекционный процесс, проникнувшие в клетку вирусные

частицы должны пройти стадию модификации, которая называется раздеванием. Смысл
раздевания заключается в удалении вирусных защитных оболочек, препятствующих
экспрессии вирусного генома. Конечный продукт раздевания - НК.
Раздевание происходит в специализированных участках клетки - лизосомах, аппарате
Гольджи, околоядерном пространстве.

При слиянии вирусной и клеточной мембран проникновение сочетается с

раздеванием.

Стадия раздевания является лимитирующей стадией инфекции. Это связано в

первую очередь с местом раздевания вируса, т.к. только путем внутриклеточного
продвижения к ядерным порам возможно достичь связывания генома вируса и генома клетки,
а, во-вторых, раздевание происходит через несколько стадий, связанных с внутренней
перестройкой вирусных частиц, нарушение в которых снижает инфекционную активность
вируса.
Реализация вирусного генома
•Транскрипция.

•Строение вирусного генома у различных

вирусов различно. Так у ДНК-вирусов и-РНК
синтезируется на матрице одной из цепей
ДНК.
•
•При этом ДНК- вирусы, репродукция
которых происходит в ядре, используют для
транскриции клеточную РНК-полимеразу-II.
•К таким вирусам относится, например, вирус
герпеса.

•ДНК-вирусы, репродукция которых может

происходить в цитоплазме, используют
собственный фермент - ДНК-полимеразу,
входящую в состав вируса.
•Пример - вирус оспы.
 У РНК(+) вирусов решение задачи наиболее простое:

Пример - корона-вирус, вызывающий у человека легкие респираторные заболевания.

У РНК(-)-вирусов передача генетической информации осуществляется по схеме:

Образование и-РНК (комплементарной последовательности) осуществляется с

помощью собственного фермента - транскриптазы.
 Среди РНК-вирусов животных есть семейство ретровирусов, которые имеют
уникальный путь передачи генетической информации по схеме:

В составе этих вирусов есть уникальный фермент - обратная транскриптаза или

ревертаза, которая переписывает информацию с РНК на ДНК.
Тот же фермент далее удваивает молекулу ДНК, т.е. на матрице полученной ДНК
синтезирует еще одну цепь.
Двунитчатая ДНК замыкается в кольцо и далее интегрирует с клеточным геномом.
Последующую транскрицию уже интегрированной вирусной ДНК клетки осуществляет
клеточная РНК-полимераза-II.
Поскольку получающаяся при этом и-РНК гомологична геномной РНК вируса, а не
комплементарна ей, ретровирусы называют "плюс-нитевыми" вирусами.
 Регуляция процесса транскрипции вирусного генома

Контроль за процессом осуществляется на протяжении всего инфекционного процесса,

как клеточными, так и вирус-специфическими механизмами.

У ДНК-содержащих вирусов существует три периода транскрипции: сверхранний, ранний и

поздний. Такой механизм регуляции называется – «каскадный».
«Каскадный» тип регуляции транскрипции генов заключается в том, что продукты
сверхранней транскрипции, например, α-белки необходимы для транскрипции другой группы
генов, кодирующих β-белки, которые, в свою очередь, включают транскрипцию следующей
группы генов – γ-белков. Количество транскриптов поздних генов превышает количество
ранних.
Первичные белки – неструктурные, поздние – структурные.

Для РНК-вирусов тип регуляции носит название «полярность». «Полярность» – это

расстояние гена от промотора. Такой тип регуляции определяется порядком расположения
генов в геноме. Количество синтезируемых молекул полипептида увеличивается от расстояния
между геном и промотором.
Ограничения со стороны клетки-хозяина следующие: в среднем работают 4 из 10 геномов
вируса.
 Трансляция.
В состав геномных белков входят вирус специфические инициаторные факторы, которые
попадая в клетку приводят к парадоксальной ситуации - за счет специфического узнавания
рибосомой вирусных и-РНК прекращается трансляцияция собственных и-РНК и начинается
трансляция вирусных и-РНК.
Обнаружены два способа трансляции:
- и-РНК транслируется в огромный полипептид-предшественник, который затем
нарезается на зрелые активные белки;
- и-РНК транслируется с образованием зрелых белков, которые затем
модифицируются.
Первый способ трансляции характерен для РНК(+) вирусов. Образующийся
полипротеид нарезается на зрелые белки клеточными ферментами.
Второй способ характерен для ДНК-вирусов и РНК(-) вирусов. Посттрансляционные
модификации заключаются в гликозилировании, метилировании, ацилировании,
сульфировании и фосфорилировании белков.
В результате получаемые после модификации зрелые белки часто не идентичны
своим предшественникам.
 Сборка вирусных частиц.

В основе самосборки лежит специфическое белок-нуклеиновое и белок-белковое узнавание. Способы

формирования вирусных частиц разнообразны.

Сборка просто организованных вирусов заключается в ассоциации вирусного генома с вирусными

капсидными белками с образованием нуклеокапсида.

У сложноорганизованных вирусов компоненты - нуклеокапсиды и суперкапсидные белки

прибывают к месту сборки независимо.
Суперкапсидные белки встраиваются в определенные зоны бислоя и модифицируют мембрану.
Нуклеокапсид узнает эти участки с помощью специальных матриксных белков (М-белки), подходит к ним,
участок мембраны постеренно выпячивается и затем отпочковывается.
В основе выпячивания лежат обычные клеточные процессы, направленные на отторжение
непригодного материала и обновление мембран.
 Выход вирусных частиц из клетки.

Существуют два способа выходавирусов из клетки: путем "взрыва" и путем почкования.

Выход из клетки путем «взрыва» связан с деструкцией клетки, нарушением ее целостности, в

результате чего клетка погибает.

Выход из клетки путем «почкования» способствует более длительной эксплуатации клетки,

включающей репродукцию вируса, пока не произойдет полное истощение ее ресурсов.

И в том, и в другом случае клетка в конце концов погибает.

Классификация

46
II. Противовирусные вакцины
1. Живые вакцины (live viral
vaccines)

2. Инактивированные
вакцины

3. Субъединичные вакцины

4. ДНК-вакцины

5. Вирусоподобные частицы

(VLP - Virus-like particles)

41