Лабораторная работа №8

Тема: Старение. Некроз. Апоптоз. Аутофагия. Молекулярные

механизмы апоптоза.
Клеточный некроз — это патологический процесс гибели клетки, который
развивается в результате ее повреждения, обусловленного действием тех или иных
неблагоприятных факторов. Морфологически некроз проявляется набуханием
цитоплазматических органелл и увеличением объема клетки, обусловленным
нарушением проницаемости клеточных мембран, а также кариолизисом,
осуществляемым действием неспецифических ДНК-нуклеаз и протеаз. Характерным
признаком некроза служит разрушение мембран лизосом и выход лизосомных
ферментов в цитозоль с последующим аутолизом (самоперевариванием) клетки. На
завершающем этапе некроза происходит нарушение целостности плазматической
мембраны, в результате чего продукты самопереваривания высвобождаются в
окружающую среду, вызывая воспалительную реакцию и повреждения соседних клеток.
Следует отметить, что некроз — это неконтролируемый и пассивный процесс.
Апоптоз представляет собой генетически запрограммированный, энергозависимый
процесс самоликвидации клетки, конечным результатом которого служит распад ее на
отдельные апоптотигеские тельца, ограниченные плазматической мембраной.
Существенная особенность апоптоза заключается в том, что фрагменты погибшей клетки
обычно очень быстро (в среднем в течение 90 мин) фагоцитируются макрофагами либо
другими соседними клетками. Благодаря этому апоптоз не сопровождается развитием
воспалительной реакции и повреждением окружающих клеток. Поэтому апоптотическую
гибель клеток часто называют «немой гибелью». Другая важная особенность апоптоза
состоит в том, что он происходит вне прямой связи с действием на клетки тех или иных
повреждающих факторов.
 Апоптоз может вызываться разнообразными сигналами. К их числу у
млекопитающих относятся факторы роста, некоторые гормоны, например
глюкокортикоиды, факторы некроза опухолей, повреждения хромосом, а также других
клеточных структур, повреждения структуры ДНК, белков и др.
Структурно-функциональные изменения клеток в ходе апоптоза во многом
обусловливаются действием цитоплазматических ферментов — каспаз на
соответствующие белки-мишени. Указанные ферменты относятся к семейству протеаз,
вызывающих разрыв пептидных связей, образованных с участием аспарагиновой
аминокислоты. У человека имеется 12 различных каспаз. Они обозначаются арабскими
цифрами (1, 2, 3 и т. д.) в соответствии с хронологией их открытия. По
структурнофункциональным особенностям каспазы, участвующие в апоптозе,
подразделяют на две группы: инициаторные (каспазы 2, 8, 9 и 10) и эффекторные
(каспазы 3,6 и 7). Инициаторные каспазы находятся в клетке в виде неактивных
мономеров прокаспаз, включающих в свой состав три функционально отличающихся
участка: продомен, а также большую и малую субъединицы. Продомен содержит
специфические аминокислотные последовательности (складки, или домены смерти) для
взаимодействия с адаптерными белками. Большая и малая субъединицы определяют
протеазную активность каспаз в отношении определенных белков. Активация
инициаторных каспаз осуществляется посредством димеризации с участием адаптерных
белков, имеющих специфические домены «складки смерти» для взаимодействия с
каспазами.
 Эффекторные каспазы представляют собой неактивные димеры- прокаспазы,
которые активируются в результате расщепления их инициатор- ными каспазами.
Мишенями эффекторных каспаз служат более 500 различных клеточных белков, с
изменением биологической активности некоторых из них связаны наблюдаемые при
апоптозе структурные и функциональные изменения клеток. Например, характерная для
апоптоза фрагментация ДНК обусловлена активацией специфической ДНКазы в
результате расщепления эффекторными каспазами белка- ингибитора указанного
фермента. С активацией под действием каспаз киназы миозина ROC-1 и фермента
гелъзолина связан характерный для апоптоза феномен «пузырения» мембраны клетки.

Внешний (рецепторно-опосредованный) путь индукции апоптоза реализуется, когда

белковые молекулы, относящиеся к семейству белковых факторов некроза опухолей, или
лиганды смерти TNFL (от англ. tumor necrosis factor ligandes), связываются со своими
рецепторами клетогной гибели TNFR (от англ. tumor necrosis factor receptors).
Факторы некроза опухолей, или лиганды смерти TNFL, продуцируются главным
образом клетками иммунной системы и могут находиться как в свободном, так и в
связанном с мембранами клеток состоянии.
Таким образом, внешний путь апоптоза реализуется по следующей схеме: сигнал
клеточной гибели - рецептор клеточной гибели - адаптерный белок - инициаторная
прокаспаза -DISK - инициаторная каспаза - эффекторная прокаспаза - эффекторная каспаза
- эффекторные белки - апоптоз.
В большинстве случаев в клетках млекопитающих апоптоз индуцируется по
внутреннему (митохондриальному) пути с участием митохондрий. Ключевое значение в
запуске апоптоза по этому пути имеет повышение проницаемости наружной мембраны
митохондрий. Большую роль в регуляции проницаемости указанной мембраны играют
белки семейства Вс1-2. По структурно-функциональным особенностям указанные белки
подразделяют на три группы: проапоптотические белки, содержащие 3 ВН-домена (Вах,
Вак и др.), антиапоптотигеские белки, в составе которых насчитывается 4 ВН-домена (Bcl-
2, Bcl-xl и др.), а также белки-активаторы и белки-дерепрессоры апоптоза, содержащие 1
ВН-домен (Bid, Bad, Bim и др.)

Проапоптотические белки вызывают повышение проницаемости наружной

мембраны митохондрий только при активации их белками-активаторами (особенно
сильными активаторами служат белки Bid и Bim). Повышение проницаемости наружной
мембраны митохондрий сопровождается освобождением цитохрома с и других белков из
перимитохондриального пространства в цитозоль. Здесь цитохром с связывается с
цитозольной мономерной протеазой Apaf-1, результатом чего служит олигомеризация
указанной протеазы с образованием крупномолекулярной структуры — апоптосомы.
Присоединение к апоптосоме прокаспазы-9 активирует указанный фермент, после чего
апоптотические процессы протекают так же, как и при внешнем апоптозе.
Таким образом, развитие апоптоза зависит от взаимодействия большой группы
белков. При этом роль сенсоров, воспринимающих специфические сигналы и
запускающих процесс апоптоза, играют белки-активаторы. Активность указанных белков
регулируется посредством разных механизмов: изменения скорости транскрипции
соответствующих генов, химической модификации указанных белков и др.