–,,

Ставропольская Государственная Медицинская Академия

Кафедра микробиологии иммунологии и вирусологии

Лекция для студентов специальностей: лечебное дело, педиатрия, стоматология

Раздел: частная микробиология, иммунология, вирусология

Лекция № 16 Патогенные спирохеты – трепонемы,

1
боррелии, лептоспиры

Общая характеристика трепонем, боррелий и лептоспир, патогенных для

человека
Бледная трепонема – возбудитель сифилиса. Таксономия, характеристика.
Этиология, патогенез
Врожденный сифилис
Методы лабораторной диагностики сифилиса. Специфическое лечение
Возбудители боррелиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологиче-
ская диагностика. Профилактика
Возбудители лептоспироза. Таксономия. Характеристика. Микробиологиче-
ская диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

Лекция обсуждена на
совещании кафедры
« »____________ 2009 г
д.м.н. Таран Т.В.

Ставрополь, 2009 г
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Спирохеты – порядок Spirochaetales

В патологии человека имеют значение 4 рода семейства Spirochaetaceae:
род Treponema (возбудитель сифилиса – Т. pallidum, возбудитель фрамбезии —
Т. pertenue, возбудитель пинты – Т. carateum); род Borrelia (возбудитель
эпидемического возвратного тифа – В. recurrentis, возбудители клещевого
возвратного тифа – В. persica, В. hispanisa и др.); род Leptospira семейства Lep-
tospiraceae (возбудитель лептоспироза – L. interrogans) и род Spirillum.
Спирохеты имеют штопорообразную – извитую форму. Они отличаются
друг от друга характером и числом завитков, длиной клеток, а также другими
морфологическими и физиологическими признаками. Имеют тенденцию к
образованию инволюционных форм.
Большинство видов спирохет – Гр(-) микроорганизмы.
Дифференциальным методом окраски является метод Романовского-Гимзы.
Интенсивность окраски по этому методу родоспецифична. Хемоорганотрофы.
Различные виды –анаэробы, факультативные анаэробы и аэробы. В их состав
входят свободноживущие, комменсальные и паразитические бактерии. У
человека можно обнаружить сапрофиты-спирохеты на поверхности кожи и
слизистых оболочках, в содержимом кишечника, в кариозных зубах и пр.
Отношение этих спирохет (Sp. dentium, Sp. buccalis) к локальным заболеваниям
человека изучено недостаточно.
2
Спирохеты – от латинского spirochaeta – бактерии в виде длинного винта
отличаются от других бактерий своим строением. Тело спирохет состоит из
многослойной наружной клеточной оболочки, которая покрывает
протоплазматический цилиндр, переплетенный с одной или более осевыми
фибриллами, отходящими от субтерминальных прикрепительных дисков,
расположенных на обоих концах цилиндра (что сближает их с простейшими).
Протоплазматический цилиндр представляет собой цитоплазму, окруженную
цитоплазматической мембраной. Вокруг протоплазматического цилиндра, в
толще клеточной оболочки, находится двигательный аппарат, представленный
периплазматическими жгутиками (фибриллами). Общее число
периплазматических фибрилл на клетку варьирует от 2 до более 100 в
зависимости от вида. Спор, капсул и жгутиков не образует. Спирохеты
обладают активной подвижностью в жидкой среде (3 типа движения в жидкой
среде: перемещение, вращение вокруг продольной оси и изгибание).

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Трепонемы (род Treponema)

3
Род Treponema включает более 10 видов и подвидов. Плохо окрашиваются
по Граму и по Романовскому-Гимзе. Выявляются при импрегнации серебром, а
также с помощью фазово-контрастной и темнопольной микроскопии. Имеют более
1 двигательной фибриллы на каждом полюсе клетки. В жидких средах
осуществляют одновременно вращательное и поступательное движение.
Среди трепонем свободноживущие в природе формы не встречаются.
Трепонемы обитают в ротовой полости, ЖКТ и половых органах животных и
4 человека.
В патологии человека имеют основное значение 2 вида трепонем - Tre-
ponema pallidum, разделенный на 3 подвида: pallidum (возбудитель сифилиса), en-
demicum (возбудитель эндемического сифилиса), pertenue (возбудитель фрамбезии)
и Treponema carateum (возбудитель пинты). Патогенные трепонемы
дифференцируют по патогенности для лаб. животных, способности сбраживать
маннит, утилизировать лактат и образовывать специфические метаболиты.

5 Возбудитель сифилиса – бледная трепонема (T. pallidum подвид pallidum)

Сифилис (люэс)- хроническое венерическое заболевание с вариабельным и
цикличным течением, характеризующееся поражением всех органов и тканей
организма (кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, нервной системы и др.).
Название этого заболевания возникло в 1525 г, когда итальянский поэт
Фракасторо опубликовал поэму о судьбе юного свинопаса по имени Сифилус,
заболевшего венерической оспой. В этом же веке французский врач окрестил
эту болезнь «чумой возлюбленных»- Lues Venera. С тех пор используются
названия этой болезни – сифилис или люэс.
Treponema pallidum –возбудитель сифилиса – был выделен в 1905 г.
6
Шаудинном и Гоффманном из экстракта твердого шанкра. Микробы плохо
контрастировались, передвигались скачками, то и дело исчезали из поля зрения,
поэтому ученые назвали их бледными трепонемами. Первые опыты заражения
обезьян сифилисом произведены Мечниковым и Ру (1905).
Вскоре после открытия возбудителя стал вопрос о его выращивании на
питательных средах. Оказалось это трудной задачей. Первые культуры были
получены Рудольфом Гельтцером, который с 1944 г по 1968 г заведовал
кафедрой микробиологии в нашем институте. Первую культуру он получил в
1922 г, затем в 1926 г. и ещё 4 штамма были выделены уже в Ставрополе в 1946
г. Все эти штаммы потеряли свои вирулентные свойства, но сохранили

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

иммуногенные. Поэтому они легли в основу при разработке серологических

методов исследования.
7
Морфология, физиология. При исследовании в темном поле зрения в
препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе или импрегнацией серебром,
бледная трепонема представляет собой спиралевидный микроорганизм длиной 6-
14 мкм,  0,2—0,3 мкм. Т. pallidum плохо воспринимает анилиновые красители
из-за малого количества нуклеопротеидов в клетке. Только при длительном
окрашивании по методу Романовского-Гимзы приобретает слабо-розовый цвет.
8 Протоплазматический цилиндр скручен в 8-12 завитков. Завитки
равномерны, расстояние между ними одинаковое. От концов клеток отходят по
3 периплазматических жгутика. Бледная трепонема по форме представляет
собой спираль, напоминающую штопор, слегка суживающийся по направлению
к концам. В электронном микроскопе можно видеть трёхслойную наружную
стенку и трёхслойную цитоплазматическую мембрану. Между ними расположен
пучок фибрилл. В организме, помимо наружной стенки, бледная трепонема
образует капсулоподобный чехол мукополисахаридной природы.
9
Движения разнообразные – от винтообразных до сгибательных.
Размножение трепонем происходит путем простого поперечного деления на две,
три и четыре части.
При действии неблагоприятных факторов, в частности лекарственных
препаратов, трепонемы могут переходить в L-форму, а также образовывать
цисты –свернутые в шар спирохеты, покрытые непроницаемой муциновой
оболочкой. Цисты могут длительное время находиться в организме больного, не
проявляя патогенности. При благоприятных для них условиях цисты спирохет
реверсируют в спиралевидные формы, размножаются и восстанавливают свою
патогенность. Цисты являются формами как устойчивого выживания, так и
размножения.
Цистообразование также широко распространено среди простейших. При
неблагоприятных условиях существования (истощение питательной среды,
наличие антител, антибиотиков, дезрастворов и т.п.) бледная трепонема
свертывается в клубок, вокруг него образуется широкая гомогенная прозрачная
оболочка, не имеющая каких-либо структурных особенностей. В некоторых
цистах имеется ещё скопления разной величины мембран, которые
рассматриваются как запас питательных материалов. Возможностью
существования цист покоя можно объяснить скрытые формы сифилиса,
длительное вялое течение, положительные серологические реакции у леченных
больных, устойчивость к лекарственным препаратам.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Помимо цист бледные трепонемы образуют атипичные формы в виде

зёрен. Особенно быстро они образуются под влиянием иммунной сыворотки.
Атипичные формы трепонем обладают такой же антигенной активностью, как и
штопорообразные трепонемы.
10
Резистентность. Трепонема малоустойчива во внешней среде (гибнет
при высыхании), но на холоде в матерчатых тканях может сохраняться до 50
сут. Прогревание при температуре 40 °С в течение часа приводит к утере
патогенных свойств. Под действием неблагоприятных факторов может
переходить в L-форму, образовывать цисты и атипичные формы в виде зёрен.
Культуральные свойства. Т. pallidum очень требовательна к составу
искусственных питательных сред и на обычных средах не растет. Она – строгий
анаэроб. Может расти на средах, содержащих печеночную или мозговую ткань
в строго анаэробных условиях при температуре 35 °С. Культивирование
трепонем в течение длительного времени приводит к потере вирулентности и
изменениям других биологических свойств (биохимических, физиологических).
Посев на ПС для установления диагноза сифилиса не имеет практического
значения, т.к. положительные результаты удается наблюдать чрезвычайно
редко.
Вопросом о способах размножения бледной трепонемы занимались
многие исследователи. Первая культура была получена Шерешевским в 1909 г.
Больше всего культур получил Гельтцер в 1929 г. Овчинников (1948)
использовал 150 вариантов различных питательных сред, различные условия
выращивания и не получил положительных результатов. Имеющиеся культуры
бледной трепонемы по биологическим свойствам не отличаются, но они
авирулентны. Для сохранения исходных свойств трепонем в лабораториях их
пассируют на кроликах – в ткани яичек животных, где они хорошо размно-
жаются.
Биохимические свойства бледной трепонемы изучены недостаточно.
Антигены. Серологические варианты не установлены. Наличие в составе
микробной клетки трепонем полисахаридных, липидных и белковых комплексов
обусловливает их сложную антигенную структуру. Большое значение имеют
работы по изучению антигенной структуры на нашей кафедре под
руководством Р.Р. Гельтцера и О.П. Крыловой, В.О.Пожарской. В основу были
положены штаммы трепонем, выделенные Гельтцером.
На кафедре проведена работа по использованию белкового антигена,
разрушенного ультразвуком. Этот антиген оказался наиболее специфичным и
до сих пор используется в реакции Вассермана. Протеинополисахаридный

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

комплекс оказался очень полезным при исследовании больных при

нейросифилисе.
11
Таким образом, трепонема содержит 3 антигена:
термолабильный антиген белковой природы;
термостабильный антиген полисахаридной природы;
липоидный антиген.
Было установлено, что ранее всего при заболевании сифилисом появляются
антитела против антигена белковой природы (2-5 день после появления шанкра).
На 7-10 день появляются положительные реакции на антиген полисахаридной
природы. Антигены являются самым важным компонентом в РСК, предложенной
Вассерманом в 1906 г. В первое время после открытия РВ в качестве антигена
применяли водные взвеси из печени сифилитического плода, полагая, что в печени
содержится большое количество бледных трепонем. Однако вскоре выяснилось,
что такие результаты получаются и в том случае, если в качестве антигена для РВ
применяются не только вытяжки из печени, но из органов здоровых животных
(сердце, печень морской свинки). С тех пор антигены, приготовленные из печени
сифилитического плода, не используются.
Длительное время широко применялись алкогольные экстракты из мышц
бычьего сердца. Это кардиолипиновый антиген. В него в настоящее время для
стандартизации добавляется лецитин и холестерин (1 часть кардиолипина + 1,7
часть лецитина + 13,3 холестерина). С 1954 г. кардиолипиновый антиген является
обязательным при постановке РВ.
Оказалось, что при всех формах сифилиса постоянным антигеном является
протеиновый антиген. Обнаружение этого антигена является неоспоримым
признаком заболевания сифилисом. Антиполисахаридные антитела стойко
определяются при нейросифилисе, а при свежих формах сифилиса количество их
невелико. Антилипоидные антитела преобладают при врожденном и скрытом
сифилисе.
При первичном сифилисе положительные результаты реакции с озвученным
антигеном появляется раньше, чем с кардиолипиновым антигеном. Это помогает
ставить диагноз в тех случаях, когда нахождение трепонем затруднено, а
клинически имеются основания подозревать сифилис. Согласно инструкции, РСК
должна ставиться с двумя антигенам - специфическим протеиновым
ультраозвученным и кардиолипиновым.
Экология и распространение. Средой обитания для бледной трепонемы
является организм человека. Животные в естественных условиях сифилисом не
болеют. Заражение происходит половым путем и редко через предметы обихода

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

(белье, посуда и др.). Попадая в окружающую человека среду, трепонемы

быстро погибают, так как они малоустойчивы к высыханию, изменениям
температуры и действию химических веществ. Так, при температуре 55°С они
гибнут через 15 мин, при 45-48 °С – через 1 ч. Чувствительны трепонемы к
тяжелым металлам (ртуть, висмут, мышьяк), кислотам и обычным
дезинфицирующим веществам.
Патогенность возбудителя и патогенез сифилиса. .
12
Экспериментальное заражение трепонемами лабораторных животных (крыс,
мышей, морских свинок) создает бессимптомную инфекцию. Заражение
кроликов в кожу или яичко позволяет размножить, накопить необходимое
количество трепонем. Эта модель дала возможность, кроме сохранения
исходных биологических свойств культур, выделенных от больных людей,
изучить их отношение к лечебным препаратам и другие вопросы инфекционной
патологии. Способность трепонем противостоять защитной реакции фагоцитов,
активно внедряться в ткани при повреждающем действии эндотоксина
обеспечивает развитие патологического процесса. Трепонемы могут проникать
через мельчайшие повреждения, незаметные для глаза. Считается, что кожа и
слизистые оболочки не являются надежной защитой против проникновения в
организм бледных трепонем. Доказано наличие бледных трепонем в
лимфатических узлах и в крови уже через несколько часов и даже минут после
заражения. Инкубационный период сифилиса исчисляется 3-4 неделями. Если
больной подвергается лечению пенициллином, инкубационный период может
удлиниться до 1,5-2 месяцев.
После инкубационного периода на месте внедрения возбудителя
возникает безболезненный плотный инфильтрат – твердый шанкр и регионар-
ный аденит - плотный увеличенный лимфатический узел. Твердый шанкр –
это плотный инфильтрат с поверхностной эрозией или язвой на месте
внедрения. На 8-10 день после появления твердого шанкра начинают
увеличиваться близлежащие лимфатические узлы. Начиная с 3-4-ой недели,
увеличиваются и становятся плотными все л/у. Появляются общие симптомы –
головные, костные, суставные и мышечные боли, может повышаться
температура до 39-40 0С. Это - первичный период сифилиса, который
продолжается примерно 6 недель. Возбудитель размножается, накапливается в
большом количестве в первичном очаге. В первые 3 недели серологические
реакции отрицательны – первичный серонегативный сифилис. С 4-ой недели
они становятся положительными – вторичный сероположительный сифилис.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

При отсутствии лечения трепонемы проникают в кровь, возникает гене-

рализация инфекции, которая сопровождается высыпаниями на коже и
слизистых оболочках. Характерный синдром – розовато-красные папулезно-
розеолезные высыпания на коже. Это - вторичный период сифилиса. Эта стадия
вторичного периода носит название «с в е ж и й». Под действием иммунной
системы большинство спирохет погибают, что обусловливает периодическое
исчезновение высыпаний.
При всех последующих повторных высыпаниях, за редким исключением,
характерны небольшие высыпания, склонные к группировке. Эту стадию
сифилиса называют вторичным рецидивирующим сифилисом. Во вторичном
периоде наблюдают развитие специфических процессов во внутренних органах, в
костной, периферической и центральной нервной системе. Возбудитель
содержится в элементах сыпи, больной опасен для окружающих. Без лечения
вторичный период продолжается 2—4 года. Вторичный сифилис может быть
свежим, рецидивным и скрытым.
Третичный период, когда в органах и тканях обнаруживается
инфекционные гранулемы. Образуются папулы, бугорки, гранулёмы (гуммы)
или гуммозные инфильтраты, склонные к распаду у нелеченных больных. Этот
период продолжается до 10 лет. При отсутствии кожных высыпаний больной
малоопасен. Возможно поражение ЦНС (прогрессивный паралич) или спинного
мозга (спинная сухотка), нарушение функций внутренних органов
(висцеральный сифилис). В этот период возбудитель может быть обнаружен в
огромном количестве в ткани мозга, где он вызывает глубокие необратимые
изменения.
Следует помнить, что разделение сифилиса на стадии носит условный
характер, т.к. последовательность их смены наблюдают далеко не во всех
случаях. Исследования последних десятилетий показали, что больные
сифилисом не обязательно проходят через весь спектр его клинических
проявлений. Считают, что приблизительно у 1/3 больных третичным
сифилисом развивается нейросифилис, у 1/3 – гуммы, а у остальных –
сердечнососудистые заболевания. Однако, например, в Эфиопии третичный
сифилис регистрируют только в форме сердечнососудистых поражений. Т.о.,
можно полагать, что клинические проявления сифилиса прямо зависят от
характера иммунологического реагирования больного, способного
останавливать поражение на любой стадии, а также от соотношения
гуморальных и клеточных реакций гиперчувствительности.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Врожденный сифилис. Тот факт, что сифилис может передаваться

потомству, был известен давно. В настоящее время дети, больные врожденным
сифилисом, регистрируются исключительно редко. Все женщины, поступающие в
роддом или женскую консультацию, проверяются на сифилис с помощью РВ.
Беременные, лечившиеся во время беременности, могут родить здоровых детей.
Проявления сифилиса у ребенка весьма разнообразны. Поражаются кожные
покровы, слизистые оболочки, костный аппарат, внутренние органы, нервная и
кровеносная системы. Инфицирование плода часто приводит к выкидышам во
второй половине беременности или мертворождениям. В случае рождения
жизнеспособного ребенка клинические проявления можно наблюдать сразу после
рождения (ранний врожденный сифилис), либо в возрасте от 5-15 лет (поздний
врожденный сифилис).
Для ранней формы характерны папулезно-розеолезные высыпания,
сифилитическая пузырчатка, остеохондриты, поражения внутренних органов
(печень, селезенка) и нервной системы (менингиты и менингоэнцефалиты).
Типичное проявление поздней формы – триада Хатчинсона – паренхиматозный
кератит, «бочкообразные зубы» и глухота (вследствие поражения лабиринта),
нередко наблюдаются изменения большеберцовых костей («саблевидные голени»).
Реакция Вассермана не всегда дает определенные и ясные результаты. У
новорожденных и грудных детей, больных сифилисом, РВ бывает отрицательной, у
детей с врожденным сифилисом она становится положительной только через 2-3
месяца после рождения.
Иммунитет. Восприимчивость человека к сифилису высока. Считается
общепризнанным, что естественный иммунитет к сифилису у человека
отсутствует, т.е. сифилисом может заболеть каждый человек. При заболевании
сифилисом в организме формируется состояние, которое в иммунологии принято
считать нестерильным или инфекционным иммунитетом. Эта форма иммунитета
характеризуется резистентностью к новому заражению до тех пор, пока в
организме находится возбудитель болезни. Как только наступает выздоровление,
освобождение организма от возбудителя, иммунное состояние исчезает, и
организм вновь становится восприимчивым к заражению.
Приобретенный иммунитет характеризуется защитными клеточными
реакциями, способствующими фиксации трепонем и образованию гранулем, но
не элиминации возбудителя из организма. Развивается и инфекционная
аллергия, которую можно выявить внутрикожным введением убитой взвеси
тканевых трепонем. На высоте иммунного ответа трепонемы образуют цисты,
которые локализуются обычно в стенке кровеносных сосудов, болезнь пе-

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

реходит в стадию ремиссии. Снижение напряженности иммунитета

сопровождается реверсией возбудителя в вегетативную стадию, его
размножением, следствием чего являются рецидивы болезни.
Образующиеся на антигенные комплексы микробной клетки антитела не
обладают защитными свойствами. Способность определенных антител
(реагинов) вступать в реакцию с кардиолипиновым антигеном используется в
серодиагностике сифилиса. Специфические антитела вырабатываются на
протеиновый антиген.
Перенесенное заболевание не оставляет невосприимчивости. После
излечения возможно повторное заболевание при реинфекции.
13
Лабораторная диагностика сифилиса включает выявление возбудителя
(в начальной стадии) и постановку серологических реакций.
Микроскопическое исследование (при первичном сифилисе).
Материалом служит отделяемое из твердого шанкра, из которого готовят
нативные препараты:
окраска по Романовскому-Гимзе применяется достаточно часто, но время
окраски удваивают. Т. pallidum подвид pallidum окрашивается в розовый
цвет, а непатогенные виды – в фиолетовый или синий;
метод серебрения по Морозову (распространен в отечественной практике,
предложено много методов серебрения). Т. pallidum подвид pallidum
выглядит чёрной или тёмно-коричневой;
темнопольная микроскопия – наиболее оптимальный метод выявления;
фазово-контрастная микроскопия.
14
Серодиагностика – доминирующие методы лабораторной диагностики;
включают неспецифические и специфические тесты.
Неспецифические тесты (без участия трепонем):
Основной из них РСК с несколькими Аг, предложенная фон Вассерманном;
также разработаны более чувствительные модификации, например,
Григорьева-Рапопорта или Вайнштейна-Резниковой, но они менее
специфичны.
VDRL-реакция (используется для предварительных исследований) –
специализированная флоккуляционная проба на предметных стеклах с
использованием кардиолипин-лецитин-холестеринового Аг – модификация
реакции Кана и цитохолевой реакции.
Тест на реагины плазмы (удобен в качестве метода экспресс-диагностики),
15 представляющий собой РА частиц угля, нагруженных кардиолипином.
Специфические тесты (в качестве Аг используют ультразвуковой
экстракт трепонем, выращенных в яичке кролика). Это высокочувствительные

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

и высокоспецифичные реакции на сифилис. Они относятся к диагностически

подтверждающим тестам. В связи с длительным сохранением специфических
АТ в организме эти реакции не могут быть использованы для оценки
эффективности лечения. Кроме того, они положительны у больных
фрамбезией и беджель.
РИБТ – реакция иммобилизации бледной трепонемы, включающая
инкубирование возбудителя с сывороткой больного, после чего бактерии
теряют подвижность (в среднем через 18 ч). Учитывают результаты в висячей
капле в темном поле;
ИФА;
РПГА;
РИФ. Методы иммунофлюоресцентной диагностики сифилиса получают
всё большее распространение (особенно непрямой иммунофлюоресценции). Их
постановка отличается простотой, доступностью и 100 % чувствительностью.
Наибольшее распространение получила РИФ с адсорбированной сывороткой
(реакция иммунофлюоресценции). В реакции иммунофлюоресценции
используется взвесь патогенных бледных трепонем штамма Николс (штамм
Николя) из яичка кролика при орхите 7-дневной давности. Взвесь трепонем
сохраняется в холодильнике до 2-4 мес. Из антигена готовят препараты на
стекле, затем наносят сыворотку больного, после чего люминесцентную
сыворотку против глобулинов человека.
Реакция Вассермана служит методом контроля качества лечения. Но
необходимо помнить, что отрицательная реакция – не единственный критерий
излечения от сифилиса. РВ может быть положительной неспецифической при
беременности и после родов, при малярии, туберкулезе лептоспирозе,
новообразованиях, при употреблении жирной пищи, спиртных напитков и др.
16
Специфическая профилактика и лечение. Специфическая
профилактика сифилиса не разработана в связи с отсутствием эффективных
вакцин. Для химиотерапии используют антибиотики пенициллинового ряда и
висмутсодержащие препараты.
Другие патогенные трепонемы и вызываемые ими заболевания
17
Treponema carateum –возбудитель п и н т ы . Заболевание встречается у
лиц с темным цветом кожи в тропических районах западного полушария.
Передается контактным путем и через мошек. На месте входных ворот образуется
папула, затем происходит генерализация процесса, сопровождающаяся
появлением различного цвета пятен на коже, гиперкератоза подошв и ладоней,
выпадением волос. Возбудитель T. carateum по морфологическим,
тинкториальным и культуральным признакам не отличается от Т. рallidum.
Лабораторная диагностика сводится к обнаружению трепонем в пораженных
участках кожи и постановке серологических реакций с сывороткой больного.
18
PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Сходное с сифилисом заболевание – ф р а м б е з и я (или тропическая

гранулёма) вызывается Т. pallidum подвид рertenue. Это заболевание
распространено в странах с тропическим климатом. Возбудитель передается не
только половым путем, а главным образом через предметы обихода, при
контакте с больным (основной путь передачи), имеющим кожные высыпания.
Болезнь носит выраженный социальный характер, наблюдаются семейные
вспышки. Характеризуется появлением в месте входных ворот болезненной
язвочки с последующими кожными высыпаниями, переходящими в
дистрофические процессы на коже и в костях. В большинстве случаев диагноз
устанавливают по характерным клиническим проявлениям и более частому
поражению детей, т.к. темнопольная микроскопия, серебрение и др. не позволяют
отдифференцировать возбудителя от бледной трепонемы.
19
С сифилисом сходен эндемичный сифилис арабских стран под местным
названием «б е д ж е л ь ». Вызывает это заболевание T. pallidum подвид endemicum.
В отличие от сифилиса «беджель» никогда не вызывает появление первичных
очагов. Поражает кожу, слизистые оболочки и костную систему с последующими
поражениями, напоминающими гуммы при сифилисе; передаётся контактно-
бытовым путем, возможен и половой путь передачи. Болезнь широко
распространена в сельской местности, преимущественно среди детей.
Для стоматологов. Род Treponema включает ряд видов, экологически связанных с полостью рта
человека. Сходные с Т. p a l l i d u m морфологически, эти микроорганизмы хорошо размножаются в анаэробных
условиях на искусственных питательных средах, содержащих сыворотку. Большинство из них – сапрофиты,
живущие в полости рта. Т. vincenti в ассоциации с фузобактериями (Fusobacterium necrophorum) участвует в
развитии фузоспирохетоза – некротической ангины Венсанта.
20
Боррелии (род Borrelia)
Спирохеты рода Borrelia вызывают как антропонозные (возвратный тиф),
так и зоонозные (болезнь Лайма) инфекционные болезни с трансмиссивным
(клещи, вши) механизмом передачи возбудителей.
Род Borrelia образуют тонкие спирохеты с 3-10 неправильными
крупными завитками; локомоторный аппарат составляют фибриллы, обычно
вращающиеся в одном направлении. Грам(-), хорошо окрашиваются
анилиновыми красителями, особенно после протравки фенолом. Строгие
анаэробы, растут при температуре 20-37 С (оптимум 28-30 С). По
Романовскому-Гимзе окрашиваются в сине-фиолетовый цвет.
Боррелии обладают уникальным, не имеющим аналогов среди других
бактерий генетическим аппаратом, который состоит из небольших размеров
линейной хромосомы и набора циркулярных и линейных плазмид.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Прихотливы к условиям культивирования, получен рост на средах,

дополненных животными белками, и на куриных эмбрионах. Включает виды,
патогенные для теплокровных; вызываемые заболевания – боррелиозы,
типовой вид – Borrelia anserina.
21 Возбудители возвратных тифов
(Borrelia recurrentis, B. duttoni, B. persica)
Возвратные тифы – группа острых инфекционных заболеваний,
вызываемых боррелиями, характеризующихся острым началом,
приступообразной лихорадкой, общей интоксикацией. Различают
эпидемический и эндемический возвратные тифы.
22 Э п и д е м и ч е с к и й в о з в р а т н ы й т и ф . Возбудитель - Borrelia recur-
rentis. Антропоноз, единственным источником возбудителя служит
лихорадящий больной, в периферической крови которого находятся боррелии.
Специфическими переносчиками боррелий являются платяная, головная
и, в меньшей степени, лобковые вши, которые становятся наиболее заразными с
6-го по 28-й день после инфицирующего кровососания. Человек заражается
возвратным тифом при втирании гемолимфы раздавленных вшей в кожу при
расчёсывании места укуса. Заболевание встречается во время социальных
бедствий, войн. На территории России в настоящее время не регистрируется.
Э н д е м и ч е с к и й в о з в р а т н ы й т и ф (син. клещевой возвратный
тиф, аргасовый клещевой боррелиоз) – зоонозное природно-очаговое
заболевание, спорадически встречающееся в отдельных субтропических,
тропических географических зонах. Возбудителями эндемического возвратного
тифа являются более 20 видов боррелий, среди которых наиболее часто
вызывают заболевание африканская Borrelia duttoni и азиатская Borrelia per-
23 sica.
Резервуаром в природе являются грызуны, а также аргасовые клещи, у
которых возбудитель передается т р а н с о в а р и а л ь н о . Человек заражается
через укусы клещей рода Ornithodoros.
Возбудителей эпидемического и эндемического возвратных тифов
дифференцируют в биологической пробе.
Патогенез, клиника возвратных тифов. Патогенез и клинические
проявления обоих типов возвратных тифов схожи. Инкубационный период в
среднем 7-8 сут.
Попав во внутреннюю среду организма, боррелии внедряются в клетки
лимфоидно-макрофагальной системы, где размножаются и поступают в

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

большом количестве в кровь, вызывая лихорадку (повышение температуры

тела до 39-40 С), головную боль, озноб. Каждая такая атака заканчивается
подъемом титра антител. Взаимодействуя с ними, боррелии образуют агрегаты,
которые нагружаются тромбоцитами, вызывая закупорку капилляров,
следствием чего является нарушение кровообращения в органах.
24
Большая часть боррелий погибает под влиянием антител. Однако в
течение инфекции антигены этих боррелий подвергаются вариации. Это
связано с наличием большого набора (несколько десятков) белковых антигенов,
синтез которых кодируется разными генами, часть которых периодически
находится в неактивной, «молчащей» форме. В результате перегруппировок в
хромосоме происходит активация «молчащего» гена и появление нового
антигенного варианта. А так как антитела вырабатываются против одного
конкретного антигена, то новые антигенные варианты боррелий появляются
неожиданно для макроорганизма и вызывают рецидив заболевания. Это может
повторяться от 3 доя 20 раз.
Прогноз эндемического возвратного тифа благоприятный. Летальность –
не более 1 %.
Иммунитет. Иммунитет к эпидемическому возвратному тифу
гуморальный, непродолжительный. В эндемических очагах коренное население
к возбудителю эндемического возвратного тифа, циркулирующему в очаге,
располагает иммунитетом.
25
Микробиологическая диагностика возвратных тифов. Используют
бактериоскопический метод – обнаружение возбудителя в толстой капле
крови, взятой на высоте лихорадочной реакции, окрашенной по Романовскому-
Гимзе. Также используют дополнительные бактериоскопические исследования:
микроскопия в тёмном поле «висячей капли» крови и негативный метод Бурри,
состоящий в просмотре исследуемой капли крови, смешанной с тушью,
серебрение боррелий в мазках крови или мазках-отпечатках из органов.
Биопробу ставят для дифференциации Borrelia recurrentis от
возбудителей эндемического возвратного тифа: м.св. легко заражаются
возбудителями клещевого возвратного тифа (эндемического), а белые мыши и
крысы - Borrelia recurrentis.
В качестве вспомогательного используют серологический метод с
постановкой РСК.
Специфическое лечение - нет. Применяют а/б тетрациклинового ряда,
левомицетин, ампициллин.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Специфическая профилактика – не проводится. Неспецифическая

профилактика сводится к борьбе с завшивленностью населения, в
эндемических очагах – с клещами и грызунами.

26 Возбудители Болезни Лайма

(Borrelia burgdorferi, Borrelia garini, Borrelia afzelii)
Болезнь Лайма (син. лаймская болезнь, хроническая мигрирующая
эритема, клещевой иксодовый боррелиоз) является хронической инфекцией, с
поражением кожи, сердечной и нервной систем, суставов. Сопровождается
развитием аутоиммунных и иммунопатологических процессов.
Возбудители своеобразного поражения из группы иксодовых клещевых
боррелиозов, известного как лаймская болезнь (хроническая мигрирующая
эритема). В отдельную нозологическую форму выделена в 1977 г., поводом
для этого послужили многочисленные случаи заболевания детей в г. Лайм
(штат Коннектикут, США) и окрестностях, сопровождающиеся развитием
ювенильного артрита. Наличие у всех заболевших мигрирующей эритемы и
предшествующих кожных поражений было основанием для подозрений на
возможность передачи через укусы членистоногих. Был выделен возбудитель -
Borrelia burgdorferi. Позднее была доказана способность Borrelia garini и Bor-
relia afzelii вызывать аналогичные поражения, зарегистрированные в странах
Старого Света с умеренным климатом.
В последние годы заболевание также известно как лаймборрелиоз –
трансмиссивное природно-очаговое заболевание. Основные переносчики на
территории РФ – клещи Ixodes ricinus и Ixodes persulcatus.
27
К настоящему времени случаи лаймборрелиоза зарегистрированы в
США, Европе, Азии и Австралии. Природный резервуар – мелкие грызуны,
олени, лоси. Человек заражается после укуса клеща Ixodes dammini (основной
переносчик) либо других иксодовых клещей с трансовариальным механизмом
передачи возбудителя; в эндемичных очагах до 20-80 % членистоногих
(клещей) содержат боррелии.
Морфология и культуральные свойства. Borrelia burgdorferi – самая
крупная боррелия (20÷30×0,2÷0,3 мкм), строение идентично таковому у прочих
спирохет, но иногда они содержат особый тип линейных плазмид, не
обнаруживаемых у других прокариот. Боррелии, выделенные из клещей,
хорошо растут на питательных средах; выделить возбудитель из материала от
больного (кровь, ликвор) удаётся редко.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Патогенез поражений. После укуса клеща Borrelia burgdorferi

локализуются в месте внедрения либо проникают непосредственно в кровоток.
Вирулентные штаммы сравнительно резистентны к микробицидным факторам
фагоцитов периферической крови, тогда как авирулентные боррелии
эффективно уничтожаются.
Боррелии адсорбируются на клетках, взаимодействуя с мембранными
гликолипидами, наиболее активно – с галактоцереброзидами поверхности
нейроглии. Инвазивная активность бактерий достаточно высока, и через 12 ч
после заражения они проникают в различные органы и ткани, а также через
гематоэнцефалический барьер, в результате чего их можно выделить из
спинномозговой жидкости.
При локальном поражении развивается синдром блуждающей эритемы,
при диссеминированном – различные поражения нервной и ССС, опорно-
двигательного аппарата, вторичные поражения кожи и др.
Клинические проявления. Инкубационный период длится от 3 до 32 сут
с момента укуса клещами. На месте укуса образуется красная папула,
появление которой совпадает с началом заболевания. Клинические проявления
лаймборрелиоза включают три стадии:
Мигрирующая эритема, которая сопровождается развитием
гриппоподобного симптомокомплекса, лимфаденита и появлением в месте
укуса клеща кольцевидной эритемы, которая быстро увеличивается в
размерах.
Стадия диссеминирования. Развитие доброкачественных поражений
сердца и ЦНС в виде миокардита и асептического менингита, которые
наблюдаются на 4-5 нед заболевания и протекают в течение одного или
нескольких месяцев. Циркуляция боррелий вызывает развитие локальных
васкулитов и окклюзий сосудов. Характерное проявление – артриты (чаще
одного коленного сустава), выявляемые у 60 % больных. Они плохо
отвечают на а/б-терапию и обусловлены формированием аутоиммунных
механизмов.
Третья стадия. Развивается через несколько месяцев или даже лет -
поражения суставов приобретают хронический характер, у части больных
(15 %) – поражения нервной системы (менингиты и менингоэнцефалиты); у
50 % - мононевриты (как периферических, так и черепных нервов),
проявляющиеся нарушением чувствительности или мышечной слабостью; в
редких случаях – тромбозы артерий, способные вызвать смерть больного.
Заболевание протекает доброкачественно. Прогноз благоприятный.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Иммунитет. Гуморальный, видоспецифический к антигенам клеточной

стенки боррелий.
Специфическое лечение и профилактика – нет. Этиотропная а/б-
терапия (тетрациклиновый ряд). Неспецифическая профилактика сводится к
использованию защитной одежды и борьбе с клещами.
28
Лабораторная диагностика. Используются бактериоскопический (на 1-й
стадии), серологический методы и ПЦР в зависимости от стадии заболевания.
Материалом для исследования служат биоптаты кожи, синовиальная жидкость
суставов, ликвор, сыворотка крови.
Начиная со 2-й стадии заболевания, осуществляется серологическое
исследование определением IgM или (через несколько месяцев от начала
заболевания) – нарастания титра IgG ИФА или РИФ. Антитела Borrelia burgdor-
feri перекрестно реагируют с Аг прочих спирохет; тем не менее у больных
лаймборрелиозом VDRL-реакция всегда отрицательна.
ПЦР используется для определения наличия боррелий в ликворе,
суставной жидкости. Большие перспективы имеет широкое внедрение метода
вестернблота, выявляющего антитела к уникальному белку (М.м. 39 кД) Bor-
relia burgdorferi.
29 Лептоспиры (род Leptospira)
Патогенные лептоспиры являются возбудителями зоонозной
бактериальной инфекции, характеризующейся волнообразной лихорадкой,
интоксикацией, поражением капилляров печени, почек, ЦНС. Взывают
поражения, известные как лептоспирозы. Возбудитель – вид Leptospira interro-
gans.
Возбудители лептоспирозов людей и животных – спирохеты,
относящиеся к виду Leptospira interrogans рода Leptospira, входящего в состав
семейства Спирохеты порядка Spirochaetales.
30 Род образуют спиральные одиночные клетки, один или оба конца м.б.
изогнуты. Двигательный аппарат представлен идущими от каждого полюса
клетки по одной фибрилле. Движение винтообразное: сгибательное или вдоль
продольной оси. Некоторое время м.б. неподвижными, напоминая веревку или
прихотливо изогнутые петли. Плохо окрашиваются по Граму и Романовскому-
Гимзе, но хорошо различимы при импрегнации серебром; легко выявляются
темнопольной микроскопией и несколько хуже – фазово-контрастной. Цист,
спор и капсул не образуют.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Хемоорганотрофы, метаболизм дыхательный, субстраты-доноры

энергии должны включать жирные кислоты в качестве источника углерода
(паразитические формы нуждаются в ненасыщенных ЖК, содержащих 15 и
более атомов углерода). Культивируются на питательных средах с
сывороточным альбумином. Особенность роста на жидкой питательной среде –
отсутствие помутнения. Растут медленно, делятся поперечным делением.
Строгие аэробы, температурный оптимум 28-30 С, оптимум рН 7,2-7,4. Род
Leptospira включает свободноживущие (напр., L. biflexa) и паразитические
виды.
Типовой вид – Leptospira interrogans.
31
Вид Leptospira interrogans
Вид представлен более чем 100 серологическими вариантами. По
биологическим свойствам их разделяют на сапрофиты, свободноживущие в
пресноводных водоёмах, и варианты, патогенные для людей и животных,
вызывающие поражения, известные как лептоспирозы. Патогенные серовары
чувствительны к действию солнечного света и высоких температур,
высушивание вызывает немедленную гибель.
Эпидемиология
Распространенность – практически повсеместно. Заболеваемость тесно
связана с деятельностью человека (с/х работы, скотоводства и др.).
Основной резервуар инфекции – дикие и домашние животные более 80
видов (жвачные, хищники, грызуны, рукокрылые и др.). Из домашних
животных особенно часто болеют свиньи, к.р.с., реже – собаки. Непрерывность
процесса циркуляции патогенных лептоспир в природе обеспечивается их
способностью колонизировать извитые канальцы коркового слоя почек
теплокровных хозяев, у которых формируется хроническое, часто пожизненное
лептоспироносительство. Возбудители отдельных серогрупп также могут
персистировать в слизистой оболочке генитального тракта (например, Hardjo – у
коров, Australis – у свиней), тканях центральной нервной системы животных
(Copenhageni – у серых крыс), глаза (Grippotyphosa – периодическая офтальмия и
рецидивирующие увеиты у лошадей). У грызунов и насекомоядных
лептоспирозная инфекция протекает бессимптомно, сопровождаясь выделением
лептоспир с мочой.
Пути передачи. Механизм передачи возбудителя сходен у всех
лептоспирозов; основной магистралью для заражения человека и животных
служит вода. Возбудитель выводится с мочой животного и загрязняет водоёмы,

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

растительность и пищевые продукты. Механизм передачи – преимущественно

фекально-оральный. Поскольку заражение через воду является доминирующим,
выделяют 3 основных фактора эпидемиологии лептоспирозов:
первично-исходные природные очаги;
антропургические очаги (преимущественно сельскохозяйственные);
больные люди (обычно тупиковые хозяева).
32
Каждый из сероваров циркулирует в популяции определенного вида
животных и является самостоятельным возбудителем заболевания.
Восприимчивость людей к лептоспирозам высокая, но больной человек, хотя и
выделяет лептоспиры в окружающую среду, не имеет практического значения в
распространении заболевания. Лептоспирозы чаще регистрируются в летне-
осенний период.
33
Ежегодно в России регистрируется до 2,5 тысяч заболеваний
лептоспирозами. Лептоспирозы выделены комитетом экспертов ВОЗ из
большого числа зоонозов как наиболее значимые в социально-экономическом
отношении нозологические формы. Это связано с широкой
распространенностью лептоспир на всех континентах, длительной
выживаемостью их в абиотической среде и свойством поражать различные
виды домашних и диких животных, которые затем служат источниками
34 инфицирования людей.
Лептоспирозная инфекция занимает одно из первых мест среди зоонозов
по тяжести клинического течения, частоте летальных исходов и отдаленных
клинических последствий. При средних показателях летальности в стране 3-
4,5 % на отдельных территориях, эндемичных по наиболее тяжелым формам,
вызываемым лептоспирами серогрупп Icterohaemorrhagiae и Canicola, они
достигают, а иногда и превышают 25-40 %. В последнее время отмечается
заметная тенденция к урбанизации лептоспирозов. Прогрессирующее
возрастание доли городского населения в общей структуре заболеваемости
обусловлено ростом типично «городских» этиологических форм лептоспирозов
(Icterohaemorrhagiae и Canicola), источником которых являются крысы и
собаки [Рахманов А.И., 2002; Басель Б. с соавт., 2006].
35
Таксономия. Лептоспиры на основании их антигенного различия
дифференцируются на серогруппы и серовары. В отличие от других
микроорганизмов каждая серогруппа имеет название. Серогрупп более 25,
сероваров более 160. Серогруппы не имеют официального таксономического
36 статуса.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Основной таксон – серовар лептоспир, напр., Leptospira interrogans

Icterohaemorrhagiae М-20 (род – Leptospira, вид – interrogans, серогруппа –
Icterohaemorrhagiae, серовар – М-20), L. interrogans Pomona Pomona, L. interro-
gans Canicola Hond Utrecht IV, L. interrogans Tarassovi LT-82, L. interrogans
Grippotyphosa Moskva V, L. interrogans Icterohaemorragiae М-20 и т.д.

Факторы патогенности. Некоторые серовары Leptospira interrogans

характеризуются гемолитической и липазной активностью, продуцируют
плазмокоагулазу, фибринолизин, цитотоксины.
Патогенез и клиника поражений. Входные ворота – слизистые
оболочки пищеварительного тракта, поврежденная кожа. Инкубационный
период – 7-10 дней. Микроб с кровью разносится к органам РЭС (печень,
почки), где размножается и вторично поступает в кровь, что совпадает с
началом болезни.
Возбудитель поражает капилляры печени, почек, ЦНС, что приводит к
развитию геморрагий в этих органах и системах. Болезнь протекает остро, с
явлениями волнообразной лихорадки, интоксикации, с желтухой, развитием
почечной недостаточности, асептического менингита. Начиная со 2-й нед,
возбудитель депонируется преимущественно в извитых канальцах почек и
исчезает из крови и других тканей. Наиболее злокачественную форму
лептоспироза (болезнь Васильева-Вейля) вызывает Leptospira interrogans
Icterohaemorrhagiae.
Специфическая профилактика проводится вакцинацией по
эпидпоказаниям убитой нагреванием, корпускулярной вакциной, содержащей 4
основных серогруппы возбудителя.
Специфическое лечение. А/б в сочетании с лептоспирозным
гетерологичным иммуноглобулином, получаемым из крови
иммунизированных волов.
Иммунитет. Перенесенная болезнь оставляет стойкий, преимущественно
гуморальный, серовароспецифический иммунитет.
37
Микробиологическая диагностика. В связи с тем, что клиническая
дифференциальная диагностика лептоспирозов представляет значительные
трудности из-за полиморфизма клинической картины, результаты
лабораторного обследования являются решающими для подтверждения
лептоспирозной этиологии заболевания [МУ 3.1.1128-02, Онищенко Г.Г.].

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Материалом для исследования служат кровь, СМЖ, моча, сыворотка

крови в зависимости от стадии заболевания. Для диагностики используют
бактериоскопический (в темном поле), бактериологический и серологический
методы, а также ПЦР, биопробу на морских свинках.
В диагностике лептоспироза ведущее место принадлежит
серологическим методам. Общепринятым стандартным тестом при
исследовании сывороток крови являются РСК и реакция микроагглютинации
(РМА), использование которой связано с необходимостью поддержания
большого количества штаммов лептоспир, относящихся к медленнорастущим и
труднокультивируемым микроорганизмам. Выращивание лептоспир
производится на дорогостоящих сывороточных средах. Учет результатов
реакции осуществляется путем микроскопии агглютинировавших живых
культур в темном поле. Эти факторы ограничивают возможность внедрения
РМА в широкую практику. При положительном результате можно видеть
образование клубков из лептоспир или возникновение «зернистого» распада
бактерий (специфической реакция считается при титре не ниже 1:400).
38
В СтавНИПЧИ в 2008 г. разработаны суспензионные лептоспирозные
диагностикумы для реакции суспензионной агглютинации РСА (слайд). РСА
осуществляется на обезжиренном предметном стекле. В качестве
положительного контроля служит взвесь лептоспир в концентрациях: 1´108;1
´107; 1´106; 1´105 м.к./мл, отрицательного – 0,9 % раствор натрия хлорида.
Специфичность реакции контролировали на гетерологичных штаммах, включая
лептоспирозные штаммы-сапрофиты. В отрицательном контроле агглютинация
отсутствовала, в то время как на стёклах с взвесями лептоспир наблюдалось
полное просветление жидкости с зернистыми хлопьями, т.е. чёткая
агглютинация. Чувствительность суспензионных диагностикумов составила
1×106-1´105 м.к./мл по корпускулярным антигенам, при отсутствии
39
агглютинации с гетерологичными штаммами. Разработанная РСА доступна для
любой лаборатории, освобождает от работы с живыми культурами лептоспир и
учета реакции под микроскопом. Учет результатов РСА на стекле возможен
через 1-3 мин, что позволяет использовать ее в качестве скрининг-теста.
Разработанные диагностикумы позволили создать тест-систему
диагностическую лептоспирозную для РСА с использованием
иммобилизованных препаратов, включающую суспензионный диагностикум
лептоспирозный, лиофилизированную взвесь лептоспирозного микроба
40 (положительный контроль), сухую навеску натрия хлорида.

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

С целью серологического скрининга и ранней диагностики лептоспирозов

используется также реакция слайд-агтлютинации, иммуноферментный анализ
(ИФА) с родоспецифическими антигенами лептоспир.
В заключение необходимо отметить, что реальный уровень
заболеваемости лептоспирозами значительно превышает регистрируемые
показатели вследствие гиподиагностики, обусловленной низкой клинической
выявляемостью больных и несовершенством методов и средств лабораторной
диагностики [Онищенко Г.Г., 2006; Савченко С.Т. с соавт., 2007].

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

Факультатив.
Лептоспиры относятся к медленнорастущим микроорганизмам, поэтому
выделение культуры имеет значение только для ретроспективного
подтверждения клинического диагноза «лептоспироз» и более детальной
расшифровки этиологии случая или вспышки [МУ 3.1.1128-02].
Реакцию макроагглютинации (РА) на стекле используют для
обнаружения антител к лептоспирам различных сероваров и серогрупп в
сыворотке крови больных лептоспирозом, используя родоспецифические
антигены (например, БАСА). Обычно РА используется для предварительного
тестирования сывороток больных с подозрением на лептоспирозную инфекцию
и массового скрининга. Техника постановки реакции проста, поэтому она
может быть использована в лабораториях любого уровня оснащенности, в т. ч.
и в клинических. Если реакция агглютинации на стекле положительна или
сомнительна, то сыворотку рекомендуется исследовать дополнительно в
реакции микроагглютинации (РМА).
Выделенные на местах штаммы лептоспир идентифицируются до
серогруппы с помощью набора диагностических агглютинирующих сывороток.
Общепринятым стандартным тестом при исследовании сывороток крови
является реакция микроагглютинации (РМА), использование которой связано с
необходимостью поддержания большого количества штаммов лептоспир,
относящихся к медленнорастущим и труднокультивируемым
микроорганизмам. Выращивание лептоспир производится на дорогостоящих
сывороточных средах. Учет результатов реакции осуществляется путем
микроскопии агглютинировавших живых культур в темном поле. Эти факторы
ограничивают возможность внедрения РМА в широкую практику.
Идентификацию выделенных штаммов проводят с помощью
перекрестной РМА. Для этого необходимо располагать гипериммунными
специфическими сыворотками против испытуемого и эталонных штаммов
лептоспир. Их перечень соответствует списку диагностических штаммов.
Штаммы относят к одной серогруппе, если титры РМА изучаемого
штамма с референс-антисывороткой и референс-штамма с антисывороткой к
изучаемому штамму превышают 10 %. Серогруппы не имеют официального
таксономического статуса. Поэтому следующим этапом идентификации
является определение серовара лептоспир (основной таксон).
После выяснения серогрупповой принадлежности штамма исследования
проводят в перекрестной РМА, но уже со штаммами, представляющими все

PAGE \
 Патогенные спирохеты – трепонемы, боррелии, лептоспиры № 16

серовары серогруппы, к которой выделенный штамм проявил наибольшее

сродство.
Эталонные штаммы и антисыворотки к ним, прореагировавшие хотя бы с
одной стороны на 10 % и более, отбирают для сравнения их с опытным
штаммом в перекрестных реакциях абсорбции. Идентификацию штаммов
лептоспир на уровне серогруппы, серовара и субсеровара можно проводить
также в РМА с панелями моноклональных антител.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР). В последнее время в лабораторную
практику широко внедряются методы генодиагностики, а именно полимеразная
цепная реакция (ПЦР) [Zuerner R.L., Bolin C.A., 1997]. В основе метода ПЦР
лежит многократное копирование (амплификация) специфического фрагмента
ДНК-мишени, который является маркерным для данного вида [Bricker B.J. et
al., 2000]. Реакция осуществляется при помощи термостабильной ДНК-
полимеразы и комплементарных ДНК-мишени олигонуклеотидных праймеров.
Образование в результате реакции фрагментов ДНК определенного размера
оценивается как факт наличия в пробе клеток искомого возбудителя и позволяет
идентифицировать исследуемую ДНК [Гинзбург А.Л., 1998].
Чувствительность ПЦР-анализа составляет величину порядка 100-
1000 м.к./мл. [Куличенко А.Н., Попов Ю.А., Наумов А.В., 1995] и имеет
преимущества над другими реакциями [Кулаков Ю. К. с соавт., 2001], но
стоимость анализа материала на порядок выше, чем при применении
серологических методов, что существенно при проведении массовых анализов,
в том числе мониторинговых. Факторами, мешающими ПЦР-детекции,
являются содержащиеся в пробах (биологических жидкостях, почве, пищевых
продуктах) вещества, ингибирующие реакции и обуславливающие ложные
результаты [Woo T.H., Patel B.K. et al., 1998].
Генетические методы видовой и внутривидовой идентификации
лептоспир пока находятся в стадии разработки и не могут быть рекомендованы
для практического использования [МУ 3.1.1128-02].
В 2005 г были выявлены 74 больных в Ставропольском крае. В июле-
августе в Красногвардейском районе развилась вспышка лептоспироза.
Заболели 42 человека. Один случай заболевания у взрослого закончился
летальным исходом.

PAGE \